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[Études biochimiques sur les composants de la camomille/III. Des études in vitro sur l'activité antipeptique de (--)-alpha-bisabolol (transl de l'auteur)]. (--)-l'alpha-bisabolol a une action antipeptique primaire en fonction de la posologie, qui n'est pas causée par une altération de la valeur du pH. L'activité protéolytique de la pepsine est réduite de 50 % par l'ajout de bisabolol dans un rapport de 1/0,5. L'action antipeptique du bisabolol n'a lieu qu'en cas de contact direct. En cas de contact préalable avec le substrat, l'effet inhibiteur est perdu.
[Démonstration de la tumeur inhibant des propriétés d'une substance à faible poids moléculaire fortement immunostimulant. Études comparatives avec l'ifosfamide sur le carcinosarcome immuno-labile DS. Stimulation de l'activité auto-immune pendant environ 20 jours par BA 1, une N-(2-cyanoéthylène)-urée. Possibilités prophylactiques nouvelles). Un rapport est donné sur la découverte récente de propriétés immunologiques exceptionnelles dans BA 1 [N-(2-cyanoéthylène)-urée] ayant une masse moléculaire (basse) M = 111,104. Des expériences sur 214 DS carcinosarcoma portant des rats Wistar ont montré que BA 1, à une dose d'environ 12 pour cent de LD50 (150 mg kg) et de mortalité négligeable (1,7 pour cent), entraîne un taux de récupération de 40 pour cent sans hyperglycémie et, dans un test, de 80 pour cent avec hyperglycémie. Sous d'autres conditions inchangées, la substance de référence ifosfamide (IF) - un développement ultérieur de la cyclophosphamide - appliquée sans hyperglycémie dans sa dose la plus efficace de 47 pour cent LD50 (150 mg kg) a entraîné un taux de récupération de 25 pour cent à une mortalité de 18 pour cent. (Au contraire de BA 1, l'hyperglycémie de 250 minutes n'a pas entraîné d'amélioration supplémentaire du taux de récupération.) Toutefois, cette comparaison est caractérisée par le fait que les deux substances présentent deux mécanismes d’action très différents (complémentaires). Les numéros de leucocytes effectués après l'application des cancérostatiques et des dosages mentionnés ont montré une stimulation prononcée avec BA 1 et avec l'ifosfamide, la suppression connue à l'intervalle post-thérapeutique généralement trouvée avec les cancérostatiques standard. En combinaison avec le test de plaque cité pour BA 1, les analyses de sang permettent alors de tirer des conclusions sur le statut de l’immunité. Étant donné que IF peut être considéré comme l'un des cancérostatiques les plus efficaces - il n'y a pas d'autre chimiothérapie connue jusqu'à présent qui a un effet plus significatif sur le carcinosarcome DS chez les rats - ces résultats sont d'une importance particulière. Enfin, la quantité totale de leucocytes et de lymphocytes ainsi que leur comportement temporel ont été déterminés à partir de l'image sanguine des rats sans tumeur après l'application intraveineuse de BA 1. Les valeurs numériques ainsi obtenues montrent clairement que d’autres recherches sur l’utilisation prophylactique de cette substance semblent nécessaires et très prometteuses.
Effet de l'étaphénone sur le flux sanguin myocardique total et régional. La répartition du flux sanguin dans les couches subendocardique, médiane et subépicardique de la paroi libre ventriculaire gauche a été étudiée chez les chiens anesthésiés dans des conditions normotoxiques (A), hypoxiques (B) et sous vasodilatation coronaire pharmacologiquement induite (étaphénone) (C). Le flux sanguin myocardique régional a été déterminé par la méthode de distribution des particules. Dans la normoxie, un gradient transmural du flux a été observé, les couches subendocardiques recevant un taux de flux significativement plus élevé par rapport aux couches subépicardiques. Dans l'hypoxie induite par la vasodilatation, ce gradient de flux transmural était persistant. En revanche, une redistribution marquée du flux régional a été observée sous vasodilatation induite pharmacologiquement. Le gradient transmural a diminué. Contrairement à certaines découvertes, ces expériences démontrent qu'une capacité vasodilatatrice considérable existe dans toutes les couches du myocarde et peut être utilisée par les médicaments. Les différences observées pour le schéma de distribution intramurale du flux sous hypoxie et la vasodilatation induite par des médicaments soutiennent l'hypothèse selon laquelle ce schéma reflète les gradients correspondants du métabolisme myocardique régional.
Influence d'un nouveau composé virostatique sur l'induction des enzymes dans le foie de rat. Le composé virostatique N,N-diéthyl-4-[2-(2-oxo-3-tetradecyl-1-imidazolidinyl)-éthyl]-1-piperazinecarboxamide-hydrochlorure (5531) a été analysé en ce qui concerne son effet sur l'induction de la tryptophane-pyrrolase et de la tyrosine aminotransférase dans le foie de rat. L'activité de base des enzymes n'a pas été influencée par la substance ni chez les animaux normaux ni chez les animaux adrenalectomisés. L'induction des enzymes par la cortisone a augmenté en présence du composé alors que l'induction du substrat est restée inchangée. L'induction de la tyrosine-aminotransférase par le dexaméthasone phosphate dans la culture tissulaire est inhibée si la dose du composé 5531 est supérieure à 5 mug/ml.
Propriétés pharmacologiques des nouveaux composés neuroleptiques. RMI 61 140, RMI 61 144 et RMI 61 280 sont des N-[8-R-dibenzo(b,f)oxépine-10-yl]-N'-méthyl-piperazine-maleates nouvellement synthétisés qui montrent des effets psychopharmacologiques intéressants. Ce travail contient les résultats d’une étude menée avec ces trois composés, afin de démontrer leur activité neuropsycholeptique par rapport à la chloropromazine (CPZ) et au chlordiazepoxyde (CPD). L'inhibition de la motilité observée chez les souris montre que les composés réduisent la motilité spontanée normale ainsi que le tonus musculaire. L'activité dépressive centrale est démontrée par une augmentation du sommeil induit par les barbituriques et une ptosis des paupières remarquable peut également être observée. Nos composés ne montrent aucune activité sur l'électroshock comme le font le CPZ et le CPD. En ce qui concerne le contour antipsychotique, nos composés montrent une forte réduction de la mortalité due à l'amphétamine chez les souris regroupées et une forte activité antiapomorphine. Ils montrent également un effet anti-agressivité et une activité inhibiteur sur le comportement d'évitement beaucoup plus fort que le CPZ. Nous avons également trouvé des effets extrapyramidaux, tels que la catalepsie, communs à de nombreux tranquillisants du genre des normes que nous utilisons. En ce qui concerne les phénomènes végétatifs, les composés montrent une action liée à la dose hypotensive allant de modérée à forte, probablement due à une inhibition de l'a-récepteur. L'activité adrénolytique contre les doses mortelles d'adrénaline, d'antisérotonin et d'effets antihistaminiques, ainsi que d'autres actions (hypothermie, analgésie, etc.) confirment que les RMI 61 140, RMI 61 144 et RMI 61 280 sont dotés de propriétés pharmacologiques similaires et plus puissantes que celles du CPZ. Des études sur le métabolisme des catécholamines cérébrales montrent qu’elles sont similaires à la CPZ, bien qu’elles aient moins d’effet sur le niveau de dopamine.
[Études sur l'action d'un agent anticholinergique en association avec un tranquillisant sur la sécrétion du jus gastrique chez l'homme]. Une étude en double aveugle avec comparaisons intra-individuelles a été réalisée pour étudier les effets de 15 mg (8r)-3alpha-hydroxy-8-isopropyl-1alphaH-tropate (Sch 1000), 15 mg Sch 1000 + 10 mg oxazepam, 10 mg oxazepam et placebo avec administration orale en séquence randomisée sur le volume du jus gastrique, la quantité d'acide, la concentration et les valeurs de pH chez 12 volontaires sains. Les paramètres de sécrétion ont été mesurés au cours d'une période basale de 1 h et d'une période de stimulation de 2 h. Le jus gastrique a été obtenu en 15 minutes par portions via le tube gastrique. La stimulation a été réalisée par 1 mug/kg/h de pentagastrine par infusion par goutte. Le test de Friedman a été utilisé pour l'évaluation statistique comparative, et des comparaisons individuelles ont été effectuées au moyen du test de Wilcoxon (rangement des différences par paires). Les résultats montrent que Sch 1000 et Sch 1000 + oxazepam ont été égaux en effet sur le volume de sécrétion basale et stimulée. Par rapport au placebo, il n'a pas été possible d'établir un effet sur le volume de sécrétion de l'oxazépam seul. Sch 1000 et Sch 1000 + oxazepam ont été trouvés pour être equipotents dans la réduction de la quantité d'acide basal, tandis que oxazepam réduit cette quantité seulement pendant les 30 premières minutes de sécrétion basale. Aucune des trois préparations actives n’a été capable d’inhiber l’acide stimulé, bien que les deux préparations Sch 1000 aient produit une tendance claire vers une baisse des valeurs moyennes. Pendant la période de sécrétion basale, les trois préparations d'essai ont eu un effet inhibiteur sur la concentration d'acide, mais aucune d'entre elles n'a eu un effet significatif pendant la période de stimulation. La valeur du pH a été facilement augmentée uniquement par Sch 1000 et Sch 1000 + oxazepam, et cela même uniquement pendant la période basale. Les résultats sont discutés.
hydrolase lysosomique de l’épiderme. I. Les glycosidés Sept glycosidases distinctes (EC 3.2) ont été caractérisées dans l'épiderme de la guimauve. Leurs propriétés indiquent qu'ils sont d'origine lysosomique. Le « profil » des glycosidases épidermiques est significativement différent de celui rapporté pour toute la peau, les activités de la bêta-galactosidase et de la bêta-acétylglucosaminidase étant très élevées et celles des enzymes restantes relativement faibles dans l'épiderme.
Hydrolyse lysosomique de l’épiderme. Les hydrolases d’ester. Cinq hydrolases d'ester distinctes (EC 3-1) ont été caractérisées dans l'épiderme de la guinéenne. Ce sont l'esterase carboxylique, la phosphatase acide, la pyrophosphatase et l'arylsulphatase A et B. Leurs propriétés sont cohérentes avec celles des enzymes lysosomiques.
Une propriété sérique hémagglutinante dépendant des groupes polycarboxylés. Une agglutinine sérique réactive avec des globules rouges en présence de groupes polycarboxyles est rapportée. Il est probable que cela représente un exemple supplémentaire du type d'agglutinin précédemment décrit comme agglutinant les globules rouges en l'absence de calcium ionisé. Des preuves expérimentales sont présentées indiquant qu'il s'agit de groupes polycarboxyliques libres qui potentialisent l'agglutination et que tout ion métallique, tel que le calcium, capable de chélater avec ces groupes s'avérera inhibiteur.
Effet des érythrocytes humains sur l'activation du complément. Le stroma des cellules rouges normales ou semblables au PNH est capable d'inhiber, dans une certaine mesure, la lysis dans le test de saccharose et d'améliorer la lysis dans le test de sérum acidifié. Les mêmes effets opposés sont montrés par les pics d'exclusion de Sephadex G-200 obtenus à partir de chaque préparation de stroma, ce qui suggère que le même facteur pourrait être responsable des deux activités. Les stromates et les pics induisent également la lysis des cellules semblables au PNH dans le sérum non acidifié, ce qui indique l'activation du complément par la voie alternative. Ceci est confirmé par l'observation immunoélectrophorétique. Lorsque le sérum activé précédemment par la voie alternative est utilisé dans le test de saccharose, la quantité de lysis est nettement réduite. Cela indiquerait que l'activation de la voie classique peut être contrôlée par la voie alternative. La signification clinique possible de ces facteurs dans la détermination de la crise hémolytique chez les patients atteints de PNH est discutée.
L'effet de l'o-salicylate sur l'activité du chemin de phosphate de la pentose dans les globules rouges normaux et déficients en G6PD. L'effet du principal métabolite de l'aspirine, à savoir de l'acide salicylique, sur la voie de phosphate de pentose (PPP) des globules rouges normaux et déficients en G6PD a été étudié. L'acide salicylique a été montré pour inhiber cette voie proportionnellement à la quantité présente. À toute concentration de cette substance, il y avait une plus grande inhibition du PPP chez les personnes déficientes en G6PD que chez les globules rouges normaux.
Les effets de la transformation des suppléments à base d'orge sur le pH rougeâtre, le taux de digestion de l'apport volontaire d'herbe séchée chez les moutons. Dans une expérience, on a étudié l'effet sur le pH rouge de l'alimentation avec des quantités limitées d'orge entière ou de granulés.1 Dans une expérience, l'effet sur le pH rouge de l'alimentation avec des quantités limitées d'orge entière ou de granulés a été étudié. Avec l'orge entière, il y avait peu de variation dans le pH de l'orge rumière associé au temps d'alimentation, mais avec l'orge granulée, le pH a diminué d'environ 7-0 avant l'alimentation à environ 5-3, 2 - 3 h après l'alimentation. Le taux de disparition de l’herbe séchée pendant l’incubation dans les rumeurs des moutons recevant de l’orge entière ou pelletée a été étudié dans une seconde expérience. Après une incubation de 24 heures, seuls 423 mg/g incubés avaient disparu dans le rumin de moutons recevant de l'orge pellétée tandis que 625 mg/g incubés avaient disparu lorsqu'il avait été incubé dans le rumin de moutons recevant de l'orge entière. L'apport volontaire d'herbe séchée des agneaux a été étudié dans une troisième expérience lorsqu'ils ont reçu des suppléments de 25 ou 50 g d'orge entière ou granulée / kg de poids vivant 0-75. Au niveau élevé, l’orge pelletée a réduit l’apport en herbe séchée de 534 g/kg, mais l’orge entière l’a réduite de seulement 352 g/kg. La digestibilité de la fibre de détergent acide a été réduite plus par l'orge pellétée que par l'orge entière, mais il y avait une tendance à une légère augmentation de la digestibilité de l'orge due à la transformation. Les implications de ces résultats sur la supplémentation des céréales à base de céréales sont discutées.
Poly (acide 8-aminoguanylique): formation d'autostructures ordonnées et interaction avec poly (acide citidylique). Poly (8-aminoguanylic acid) a en solution neutre une nouvelle structure ordonnée de haute stabilité. Le groupe 8 amino permet la formation de trois liens d'hydrogène entre deux résidus le long de l'axe long des purines. Les protons habituels de liaison à l'hydrogène et les sites d'accouplement Watson-Crick ne sont pas impliqués dans l'association. Le schéma de liaison a un double axe de rotation et est hémiprotoné à N(7). Poly(8NH2G) est converti par titration alcaline (pK = 9,7) à une structure ordonnée tout à fait différente, qui est la forme préférée sur la plage d'environ pH 10-11. Le schéma de liaison semble être composé d'un ensemble planaire, tetramérique de résidus de guanine, dans lequel le groupe 8-amino ne participe pas à la liaison interbase à l'hydrogène. Poly (8NH2G) n'interagit pas avec poly(C) en solution neutre en raison de la haute stabilité de l'auto-structuration du G-G hémiprotoné. Titrage au plateau alcalin, cependant, permet la formation prête d'une hélice Watson-Crick à deux filets. Contrairement au monomère 8NH2GMP, le poly(8NH2G) ne forme en aucune circonstance une hélice triple avec le poly(C). Les propriétés des structures ordonnées sont interprétées en termes d'une forte tendance du groupe 8-amino à former un troisième lien interbase d'hydrogène, lorsque cette possibilité n'est pas empêchée par un pH élevé.
Effet du pH sur les constantes cinétiques du substrat et de l'inhibiteur de l'alanine aminopeptidase hépatique humaine. preuve pour deux groupes de centres actifs ionisables. La présence d'au moins deux groupes de centres actifs ionisables a été détectée par une étude de l'effet du pH sur la catalyse de l'hydrolyse de L-alanyl-beta-naphtylamide par l'alanine aminopeptidase hépatique humaine et sur l'inhibition de l'hydrolyse par des inhibiteurs et des analogues de substrat. Les inhibiteurs de l'acide octanoïque, de l'octylamine et des peptides ont été trouvés comme des inhibiteurs compétitifs et sont donc censés lier le centre actif. L-Phe a été précédemment montré pour lier le centre actif puisqu'il a été trouvé pour être un inhibiteur concurrentiel de l'hydrolyse des substrates de tripeptides (Garner, C. W., et Behal, F. J. (1975), Biochimie 14, 3208). Un parcours de pKm vs. pH pour le substrat L-Ala-beta-naphtylamide a montré que la liaison diminuait en dessous du pH de 5,9 et au-dessus de 7,5, les points où la courbe théorique subit un changement intégral de pente. Ces points sont interprétés comme le pKa soit des groupes ionisables de substrat ou des groupes centraux actifs enzymatiques dépendant de la liaison. Des parcelles similaires de pKm vs. pH pour L-alanyl-p-nitroanilide (en tant que substrat) et pKi vs. pH pour L-Leu-Leu-L-L-Leu et D-Leu-L-Tyr (en tant qu'inhibiteurs) ont donné des valeurs de pKa par paires de 5,8 et 7,4, 6.0 et 7,5 et 5,7 et 7,5 respectivement. Tous les substrats ci-dessus (et D-Leu-L-Tyr) ont des valeurs de pKa proches de 7,5; par conséquent, le groupe liant-dépendant avec une valeur de pKa proche de 7,5 est probablement ce groupe de substrat. Des parcelles similaires de pKi vs. pH pour les inhibiteurs L-Phe, L-Met, L-Leu, octylamine et acide octanoïque n'ont eu qu'un seul point de courbure à 7.7, 7.6, 7.4, 6.3 et 5.9, respectivement. Les inhibiteurs des acides aminés, l'octylamine et l'acide octanoïque n'ont pas de groupes avec des valeurs de pKa entre 5 et 9. Ces données indiquent qu'il existe deux groupes ionisables centraux actifs avec des valeurs de pKa d'environ 6,0 et 7,5, qui sont impliqués dans la liaison au substrat ou la liaison aux acides aminés inhibiteurs, mais pas dans la catalyse car Vmax était constant à toutes les valeurs de pH testées.
La formation de complexes transitoires dans la réaction catalyseuse de la glutamate déshydrogénase. La réaction de la glutamate déshydrogénase et du glutamate (gl) avec NAD+ et NADP+ a été étudiée avec des techniques de flux arrêté. L'enzyme était présente dans toutes les expériences en excès de la coenzyme. Les résultats indiquent que le complexe ternaire (E-NAD(P)H-kg) est présent comme un intermédiaire dans la formation du complexe stable (E-NAD(P)H-gl). L'identification des complexes est basée sur leur spectre d'absorption. La liaison de la coenzyme à (E-gl) est l'étape limite de la vitesse dans la formation de (E-NAD(P)H-kg) tandis que la dissociation de l'alpha-ketoglutarate (kg) de ce complexe est l'étape limite de la vitesse dans la formation de (E-NAD(P)H-gl). Le Km pour le glutamate était de 20-25 mM dans la première réaction et de 3 mM dans la formation du complexe stable. Les valeurs de Km étaient indépendantes de la coenzyme. Les taux de réaction avec NAD+ étaient environ 50 % plus élevés que ceux avec NADP+. En outre, une concentration élevée de glutamate a inhibé la formation de (E-NADH-kg) alors qu'aucune inhibition du substrat n'a été trouvée avec NADP+ en tant que coenzyme. L'ADP a augmenté tandis que le GTP a réduit le taux de formation (E-NAD(P)H-gl). Le taux de formation de (E-NAD(P)H-kg) a été inhibé par l'ADP, alors qu'il a augmenté à une concentration élevée de glutamate lorsque de petites quantités de GTP ont été ajoutées. Les résultats montrent que l'activité plus élevée trouvée avec NAD+ par rapport à NADP+ dans les conditions d'essai d'état stable n'implique pas nécessairement la liaison de NAD+ au site d'activation ADP de l'enzyme. De plus, l'inhibition du substrat trouvée à une concentration élevée de glutamate dans des conditions d'essai d'état stable n'est pas due à la formation de (E-NAD(P)H-gl) car ce complexe est formé avec Km de 3 mM de glutamate, et l'inhibition du substrat n'est significative que à 20-30 fois cette concentration.
Cerveau humain et acétyltransférase de choline placentaire: purification et propriétés. L'acétyltransférase de choline (EC 2.3.1.6) catalyse la biosynthèse de l'acétylcholine selon l'équation chimique suivante: acétyl-CoA + choline en équilibre à l'acétylcholine + CoA. Outre le tissu nerveux, le placenta des primates est la seule autre source animale qui contient une acétylcholine considérable et son enzyme biosynthétique. Le noyau caudate du cerveau humain et l'acétyltransférase de la choline placentaire humaine ont été purifiés à l'homogénéité électrophorétique en utilisant l'échange d'ions et la chromatographie d'affinité bleue dextrane-sepharose. Les poids moléculaires déterminés par la filtration du gel de Sephadex G-150 et l'électrophorèse du gel de dodécylsulfate de sodium sont 67000 plus ou moins 3000. N-Éthylmaleimide, p-chloromètre curibenzoate et dithiobis (2-acide nitrobenzoïque) inhibent l'enzyme. Dithiothreitol inverse l'inhibition produite par ces deux réactifs. Le pKa du groupe associé à l'inhibition de la N-éthylmaléimide est de 8,6 plus ou moins 0,3. Un acétyl thio-enzyme chimiquement compétent est isolable par filtration au gel Sephadex. Les enzymes du cerveau et du placenta sont jusqu’à présent physiquement et biochimiquement indistinguibles.
Stabilisation de la structure globulaire du ferricytochrome c par le chlorure dans les solvants acides. Des concentrations croissantes de chlorure ont été trouvées pour augmenter la résolution entre deux transitions spectrales d'absorption visibles associées à l'acidification du ferricytochrome c. L'analyse d'une variété de mesures spectrales et de viscosité indique que la protonation d'un seul groupe ayant un pK apparent de 2.1 +/- 0,2 et un pK intrinsèque d'environ 5,3 déplace le ligand de méthionine sans perturber de manière significative la conformation globulaire native. L'analyse du ferricytochrome c méthylé suggère que la protonation d'un ion carboxylate, probablement un résidu de propionate d'hème, est responsable du déplacement du ligand de la méthionine. L'ajout d'un proton à un deuxième groupe ayant un pK apparent de 1,2 +/- 0,1 déplace le ligand d'histidine et déploie la protéine d'une conformation globulaire dans une bobine aléatoire. Il est très probable que la seconde protonation se produise sur l'anneau d'imidazole du ligand histidine lui-même. Le chlorure est proposé pour perturber ces transitions par ligation dans la cinquième position de coordination de l'ion hème. Une telle ligation stabilise une conformation globulaire du ferricytochrome c à un pH de 0,0 et 25 degrés.
Une méthode d'étiquetage compétitive pour la détermination des propriétés chimiques des groupes fonctionnels solitaires dans les protéines. Les propriétés des groupes fonctionnels d'une protéine peuvent être utilisées comme échantillons intégrés de la structure de la protéine. Nous avons développé une procédure générale par laquelle la constante d'ionisation et la réactivité chimique des groupes fonctionnels solitaires dans les protéines peuvent être déterminées. La méthode peut être appliquée à la chaîne latérale de l'histidine, de la tyrosine, de la lysine et de la cystéine, ainsi qu'au terminal aminé de la protéine. La méthode, qui est une extension de la technique d’étiquetage concurrentiel utilisant [3H]- et [14C]1-fluoro-2,4-dinitrobenzène (N2ph-F) dans une procédure de double étiquetage, est rapide et sensible. L'avantage est tiré du fait qu'après l'hydrolyse acide d'une protéine dinitrophénylée, un dérivé est obtenu qui doit être dérivé d'une position unique dans la protéine. La méthode a été appliquée au résidu d'histidine solitaire de lysozyme, de protéase alpha-lytique et de trypsine Streptomyces griseus (S.G.) ainsi qu'au terminal aminé de cette dernière protéine. Les paramètres suivants ont été obtenus pour la réaction avec N2ph-F à 20 degrés C à 0,1 N KCl: l'histidine du lysozyme blanc d'œuf de poule, pKa de 6,4 et la constante de vitesse secondaire de 0,188 M-1 min-1; l'histidine de la protéase alpha-lytique, pKa de 6,5 et la constante de vitesse du second ordre de 0,0235 M-1 min-1; l'histidine de S.G. trypsine, pKa de 6,5 et la constante de vitesse du second ordre de 0,0328 M-1 min-1; le valyl amino-terminus de S.G. trypsine, pKa de 8,1 et la constante de vitesse du second ordre de 0,403 M-1 min-1. En outre, les résultats obtenus fournissent des indices sur les microenvironnements de ces groupes fonctionnels et indiquent que les protéines étudiées subissent des changements de conformation dépendant du pH qui affectent le microenvironnement, et par conséquent la réactivité chimique de ces groupes.
Modification de l'arginine et de la lysine dans les protéines avec 2,4-pentanédion. Les amines primaires réagissent avec 2,4-pentanédion à pH 6-9 pour former des enamines, N-alkyl-4-amino-3-penten-2-ones. Ces derniers composés régénèrent facilement l'amine primaire à faible pH ou lors d'un traitement à l'hydroxylamine. La guanidine et les guanidines remplacées réagissent avec 2,4-pentanédione pour former des 2-amino-4,6-diméthylpyrimidines remplacées par N à un taux qui est inférieur d'au moins un facteur de 20 par rapport au taux de réaction de 2,4-pentanédione avec les amines primaires. La modification sélective des chaînes latérales de lysine et d'arginine dans les protéines peut être facilement réalisée avec 2,4-pentanédion. La modification de la lysine est favorisée par la réaction à pH 7 ou pour des temps de réaction courts à pH 9. La modification sélective de l'arginine est obtenue par réaction avec 2,4-pentanédione pendant de longues périodes à pH 9, suivie par le traitement de la protéine avec de l'hydroxylamine. L'étendue de la modification des chaînes latérales de lysine et d'arginine peut facilement être mesurée par spectroscopie. La modification du lysozyme avec 2,4-pentanédion à pH 7 entraîne la modification de 3,8 résidus de lysine et moins de 0,4 résidus d'arginine en 24 heures. La modification du lysozyme avec 2,4-pentanédion à pH 9 entraîne la modification de 4 résidus de lysine et de 4,5 résidus d'arginine en 100 h. Le traitement de cette protéine modifiée avec de l'hydroxylamine a régénéré les résidus de lysine modifiée mais n'a pas entraîné de changement dans les résidus d'arginine modifiée. Un résidu d'arginine semble être essentiel à l'activité catalytique de l'enzyme.
L'origine de l'inactivation alcaline du pepsinogène. Au-dessus du pH de 8,5, le pepsinogène est converti en une forme qui ne peut pas être activée en pepsine en cas d'exposition à un pH bas. L'exposition intermédiaire au pH neutre, cependant, renvoie la protéine à une forme qui peut être activée. Des preuves sont présentées pour un changement réversible, de petite conformation dans la molécule, distinct du déploiement de la protéine. Dans le même temps, la molécule est convertie en une forme de solubilité limitée, qui est précipitée à faible pH, où l'activation est normalement observée. Les résultats sont interprétés en termes de la structure particulière de la molécule de pepsinogène. La titration de la région terminale de base NH2 produit une forme ouverte, qui peut revenir à la forme native à pH neutre, mais qui est maintenue à un pH bas par la neutralisation des groupes carboxylés dans la portion de pepsine.
Dihydrofolate réductase du foie bovine: purification et propriétés de l'enzyme. Une procédure de purification est rapportée pour l'obtention de dihydrofolate de réductase de foie bovine en rendement élevé et en quantités de 100-200 mg. Une étape clé dans la procédure est l’utilisation d’un gel d’affinité préparé en couplant la pteroyl-L-lysine à la sépharose. La réductase purifiée a une activité spécifique d'environ 100 unités / mg et est homogène selon l'ultracentrifugation analytique, l'électrophorèse du gel de polyacrylamide et la titration avec le méthotrexate. Les produits de la première étape de la dégradation d'Edman indiquaient une pureté minimale de 79%. La réductase a un poids moléculaire d'environ 21500 sur la base de la composition des acides aminés et 22100 +/- 300 de la sédimentation de l'équilibre. Il n’est pas inhibé par l’antisérum de la Streptococcus faecium reductase (isoenzyme 2). Contrairement à la réductase de beaucoup d'autres tissus vertébrés, l'enzyme bovine est inhibée par les mercureaux plutôt que activée et elle a un seul pH optimal à la fois faible et haute force ionique. Cependant, la position du pH optimal est déplacée et l'activité augmentée par l'augmentation de la force ionique. La dégradation automatique d'Edman a été utilisée pour déterminer 34 des 37 résidus d'acides aminés aminés. Il existe une homologie considérable entre cette région et les régions correspondantes de la réductase de S. faecium et d'Escherichia coli. Cela renforce l’idée que cette région contribue à la structure du site de liaison pour le dihydrofolate.
Purification et propriétés de l'Escherichia coli dihydrofolate reductase. La dihydrofolate réductase a été purifiée 40 fois à l'homogénéité apparente d'une souche résistante au triméthoprim d'Escherichia coli (RT 500) en utilisant une procédure qui comprend la chromatographie de la colonne d'affinité au méthotrexate. Les déterminations du poids moléculaire de l'enzyme en fonction de sa composition aminée, de sa vitesse de sédimentation et de l'électrophorèse du gel de dodécylsulfate de sodium ont donné des valeurs de 17680, 17470 et 18300, respectivement. Une forme agrégée de l'enzyme à faible activité spécifique peut être séparée du monomère par filtration au gel; le traitement de l'agrégat avec du mercaptoéthanol ou du dithiothreitol entraîne une augmentation de l'activité enzymatique et une régénération du monomère. De plus, plusieurs formes moléculaires du monomère ont été détectées par l'électrophorèse du gel de polyacrylamide. L'enzyme non résolue expose deux pH optima (pH 4,5 et pH 7.0) avec du dihydrofolate comme substrat. L'activité la plus élevée est observée dans les tampons contenant de grands cations organiques. Dans 100 mM de chlorure d'imidazole (pH 7), l'activité spécifique est de 47 mumol de dihydrofolate réduit par minute par mg à 30 degrés. L'acide folique sert également de substrat avec un seul pH optimal de 4,5. À ce pH, le Km pour le folate est de 16 muM, et le Vmax est 1/1000 du taux observé avec le dihydrofolate en tant que substrat. Les cations monovalentes (Na+, K+, Rb+, et Cs+) inhibent la dihydrofolate réductase ; à une force ionique donnée, le degré d'inhibition est une fonction du rayon ionique du cation. Les cations divalentes sont des inhibiteurs plus puissants ; l'I50 de BaCl2 est de 250 mM, par rapport à 125 mM pour KCl. Les anions n’inhibent ni n’activent l’enzyme.
L'influence du pH sur l'interaction des inhibiteurs avec l'isomérase du trioséphosphate et la détermination du pKa du groupe carboxyle du site actif. Les effets de l'ionisation sur la liaison des analogues potentiels de l'état de transition 2-phosphoglycolate et 2-phosphoglycolhydroxamate semblent être attribuables au changement de l'état d'ionisation des ligands eux-mêmes, il n'est donc pas nécessaire de postuler la participation supplémentaire d'un résidu d'ionisation au site actif de l'isomérase du triosphosphate pour expliquer l'influence du changement de pH sur Ki dans la plage neutre. La liaison de l'inhibiteur concurrentiel sulfate inorganique est insensible aux changements de pH dans la plage neutre. 3-Chloroacétol sulfate, synthétisé comme un réactif spécifique au site actif pour l'isomérase du trioséphosphate, est utilisé pour fournir une indication de la pKa du groupe carboxyle essentiel de cette enzyme. Les réactifs spécifiques au site actif précédemment décrits pour l'isomérase étaient des esters de phosphate, et leur changement d'état d'ionisation (accompagné d'éventuelles modifications de leur affinité pour le site actif) peut avoir compliqué les tentatives antérieures de déterminer le pKa du groupe carboxyle essentiel à partir de la dépendance du pH du taux d'inactivation. En tant qu'acide monoprotique fort, le sulfate de chloroacétol est mieux adapté à la détermination du pKa du groupe carboxyle. Le sulfate de chloroacétol inactive l'isomérase de trioséphosphate par l'esterisation sélective du même groupe carboxyle que celui qui est estérifié par les esters de phosphate décrits ci-dessus. À partir de la dépendance du pH de la vitesse d'inactivation de l'isomérase du trioséphosphate de levure, le pKa apparent du groupe carboxyle du site actif est estimé à 3,9 +/- 0,1.
Inhibition des monoanions et études de résonance magnétique nucléaire 35Cl de la dipéptidase rénale. Des analyses cinétiques de l'inhibition des monoanions et de la résonance magnétique nucléaire 15Cl à 5,88 MHz ont été employées pour étudier les interactions des monoanions avec l'enzyme métalloenzyme du zinc, la dipéptidase rénale. L'hydrolyse enzymatique catalysée de la glycyldéhydrophénylalanine a montré une inhibition concurrentielle lorsque le taux de réaction a été déterminé en présence des anions monovalents fluorure, chlorure, bromure, iodure, azure, nitrate ou thiocyanate ou lors de l'ajout de l'anion divalent, sulfate. L'inhibition concurrentielle a été produite par ces anions. Un anion était lié par molécule d'enzyme, et à l'exception du fluorure, tous les anions semblaient se lier au même endroit. L'ion cyanure produit une inhibition beaucoup plus efficace de la dipéptidase rénale que les autres monoanions, et il a été montré que deux ions cyanure étaient liés par molécule d'enzyme. Une étude de l'effet du pH sur l'inhibition des monoanions a suggéré que les inhibiteurs des anions se lient au groupe avec un pK d'environ 7,8. La dissociation complète de ce groupe (pH approximatif de 8,4) élimine l'effet inhibiteur des anions. L'élargissement de la ligne 35Cl produit par la dipéptidase rénale dans 0,5 M de solutions de NaCl était 100 fois plus efficace que celui produit par des concentrations équivalentes d'aquozinc(II). L'élargissement de la ligne dépendait de la concentration de l'enzyme métallique et était indépendant de la fréquence du rayonnement excitant. Lorsque l'ion de zinc a été retiré de l'enzyme métallique par dialyse ou lorsque le chlorure a été titré de l'enzyme métallique par le cyanure, l'élargissement de la ligne a diminué. Le traitement de la dipéptidase rénale avec des concentrations saturantes de l'inhibiteur concurrentiel, le triphosphate de guanosine, en présence de 0,5 M NaCl a également produit une diminution significative de la largeur de la ligne 35Cl. L'élargissement de la ligne 35Cl produit par la dipéptidase rénale a été montré diminuer avec l'augmentation du pH à travers la plage de pH de 5,8 à 10,8. Cette variation de la largeur de la ligne avec le pH semblait résulter de la titration d'un site sur la métaloprotéine avec un pK approximatif de 7,4. Les études de température de la ligne d'élargissement de 35Cl par l'enzyme métallique en présence d'inhibiteurs du chlorure et du cyanure suggèrent que le processus d'échange rapide est impliqué et que le mécanisme de relaxation dominant est de nature quadrupolaire.
L'interaction de l'érythrocyte bovine superoxyde dismutase avec le peroxyde d'hydrogène: inactivation de l'enzyme. L'érythrocyte bovine superoxyde dismutase a été lentement et irréversiblement inactivé par le peroxyde d'hydrogène. Le taux de cette inactivation dépendait directement des concentrations de H2O2 et de l'enzyme, et sa constante de taux de deuxième ordre à pH 10.0 et 25 degrés était de 6,7 M-1 sec-1. L'inactivation a été précédée d'un blanchiment dû à une réduction rapide de Cu2+ sur l'enzyme, et après cela, il y a eu une réapparition progressive d'une nouvelle absorption dans la région visible, qui coïncide avec la perte d'activité catalytique. L'inactivation de l'enzyme était dépendante du pH et indiquait une ionisation essentielle dont le pKa était d'environ 10,2. La substitution d'H2O par D2O a augmenté ce pKa mais n'a pas diminué l'activité catalytique de la superoxide dismutase, mesurée à pH 10.0. Plusieurs composés, y compris la xanthine, l'urate, le format et l'azide, protègent l'enzyme contre l'inactivation par H2O2. Les alcools et le benzoate, qui détruisent les radicaux hydroxyliques, ne protègent pas. Les composés ayant une affinité spéciale pour l'oxygène singlet étaient également inefficaces. Les données ont été interprétées en termes de réduction de l'enzyme liée Cu2+ à Cu+, par H2O2, suivi d'une réaction de type Fenton du Cu+ avec H2O2 supplémentaire. Cela générerait Cu2+-OH- ou son équivalent ionisé, Cu2+-O--, qui pourrait alors attaquer oxydativement une histidine adjacente et ainsi inactiver l'enzyme. Les composés qui protégeaient l'enzyme auraient pu le faire en réagissant avec l'oxydant lié, en concurrence avec l'histidine adjacente.
Études de dichroïsme circulaire et de fluorescence d'anticorps homogènes au polysaccharide pneumocoque de type III. Le dichroïsme circulaire quasi-ultraviolet (CD) de trois anticorps pneumocoques homogènes anti-type III en l'absence et la présence du ligand hexasaccharide spécifique a été étudié. En outre, des recombinations et des hybridisations des chaînes H et L dérivées de deux de ces anticorps ont été effectuées et le spectre CD des molécules IgG reconstituées liées et libres a été mesuré. Les résultats indiquent que les spectres CD des anticorps natifs dans la gamme 260-310 nm sont très similaires en forme et en signe et présentent une bande positive à 285 nm. Les molécules d'anticorps homologues reconstituées ont présenté des spectres CD très similaires en forme et en signes à ceux des molécules d'anticorps natives, bien que les molécules recombinantes ne soient plus stabilisées par des liens de disulfide interchaîne. Avec l'ajout du ligand hexasaccharide, une diminution significative de l'amplitude du spectre CD (18-21%) s'est produite dans les trois anticorps natifs et leurs fragments Fab ainsi que dans les molécules recombinantes homologues. Aucun changement spectral de CD ne pouvait être détecté lors de l'interaction du ligand hapté avec les recombinants hétérogènes. Tous les anticorps homogènes étudiés ont montré une fluorescence éteignante sur la liaison des oligosaccharides et un changement bleu du maximum d'émission. Cette propriété a permis de déterminer la constante de liaison d'un anticorps sélectionné. Ensemble, les données spectroscopiques de CD et de fluorescence suggèrent que les ligands oligosaccharides induisent des changements de conformation détectables dans le fragment Fab de l'anticorps.
Changements de conformation induits dans un anticorps pneumocoque homogène anti-type III par des oligosaccharides de taille croissante. La polarisation circulaire de la luminescence (CPL) émise par les résidus de tryptophane a été utilisée comme sonde sensible pour mesurer les changements structurels induits par le ligand dans un anticorps pneumocoque homogène de type III. Une série de ligands oligosaccharides de taille croissante dérivés du polysaccharide de type III par hydrolyse acide partielle a été analysée. Des changements induits par le ligand dans la polarisation circulaire de la fluorescence de l'anticorps ont été observés pour tous les antigènes testés, y compris les tétra-, hexa-, et octasaccharides et un oligomère résiduel 16, les changements les plus importants étant enregistrés lors de l'interaction avec le polysaccharide pneumococcique (SIII) intacte soluble de type III. Lorsque des fragments Fab' ou F(ab')2 ont été utilisés à la place de l'anticorps IgG pour lier le polysaccharide SIII, l'étendue des changements de conformation a été réduite. Cela suggère des interactions entre les portions Fab et Fc dans la molécule IgG et des changements de conformation ultérieurs dans la partie Fc lors de la liaison antigène. La réduction des liens disulfides interchains a aboli les changements spectrales supplémentaires attribués à la partie Fc mais pas les changements observés dans la partie Fab, suggérant ainsi que la présence du lien disulfide interchaine dans la région de la pendule est nécessaire pour que les changements CPL maximales se produisent. Les petits ligands monovalents, c'est-à-dire les tétra-, hexa-, et octasaccharides, étaient capables d'induire des modifications de la CPL dans la partie Fab de la molécule d'anticorps ainsi que des modifications de la CPL attribuées à la partie Fc. Un ligand multivalent contenant environ 16 résidus de sucre semble être la taille antigénique minimale nécessaire pour déclencher les changements de conformation attribués à la partie Fc, semblable à ceux observés dans l'interaction avec l'ensemble de l'antigène polysaccharide.
La preuve de l'implication d'une protéine ribosomique 50S dans plusieurs sites actifs. Le rôle fonctionnel de la protéine ribosomique B-L3 de Bacillus stearothermophilus 50S (probablement homologue à la protéine Escherichia coli L2) a été examiné par modification chimique. Le complexe [RNA B-L3-23S] a été photooxydé en présence de rose bengal et de la protéine modifiée incorporée par reconstitution dans des sous-unités ribosomiques 50S contenant tous les autres composants non modifiés. Les particules contenant du B-L3 photooxydé sont défectueuses dans plusieurs essais fonctionnels, y compris (1) la synthèse poly(U)-directe de poly(Phe), (2) l'activité de la peptidyltransférase, (3) la capacité d'associer avec un complexe [30S-poly(U)-Phe-tRNA] et (4) la liaison du facteur d'allongement G et GTP. Les taux de perte des activités fonctionnelles partielles pendant la photooxydation de B-L3 indiquent qu'au moins deux événements d'inactivation indépendants se produisent, un plus rapide, impliquant l'oxydation d'un ou de plusieurs résidus d'histidine, affectant les activités d'association de la peptidyltransférase et des sous-unités et un plus lent affectant la liaison de l'EF-G. Par conséquent, la protéine B-L3 contient un ou plusieurs résidus d'histidine qui sont essentiels pour l'association de la peptidyltransférase et de la sous-unité, et un autre résidu qui est essentiel pour la liaison de l'EF-G-GTP. B-L3 peut être la protéine de la peptidyltransférase ribosomique, ou une partie du site actif, et peut également contribuer aux groupes fonctionnels des autres sites actifs.
L'interaction de la phospholipase A2 avec les interfaces micellaires. Rôle de la région N-terminale. La localisation du site de reconnaissance de l'interface précédemment postulé (IRS) dans la phospholipase pancréatique porcine A2, nécessaire à une interaction spécifique entre l'enzyme et les interfaces lipide-eau organisées, a été étudiée par spectroscopie de différence ultraviolette, par des mesures de la fluorescence intrinsèque du résidu unique de Trp, et par des expériences de protection contre l'hydrolyse tryptique spécifique. En utilisant les analogues de substrat enzymatiquement non dégradables: CnH(2n+1)(0-)OOCH2CH2N+(CH3)3-(H,OH), il est démontré que la séquence N-terminale plutôt hydrophobe de l'enzyme, à savoir Ala-Leu-Trp-Gln-Phe-Arg, est directement impliquée dans l'interaction avec l'interface lipide-eau. En plus de l’hydrophobie, les interactions polaires contribuent probablement aussi au processus de liaison. À pH neutre ou acide, la présence d'un pont de sel entre le groupe alpha-NH3+ N-terminal et une chaîne latérale négativement chargée stabilise le site de reconnaissance de l'interface et permet à l'enzyme de pénétrer les surfaces micellares, même en l'absence d'ions métalliques. Au pH alcalin, l'interaction de l'enzyme avec les interfaces micellulaires nécessite la présence d'ions Ca2+ (Ba2+).
Phospholipase A2 comme sonde de distribution des phospholipides dans les membranes érythrocytaires. Facteurs influençant la spécificité apparente de la réaction. L'action de la phospholipase de venin de serpent A2 sur les érythrocytes humains intacts a été étudiée en détail. La phospholipase de base d'Agkistrodon halys blomhifii a été trouvée pour induire à la fois l'hydrolyse des phospholipides de membrane et l'hémolyse cellulaire totale dans certaines conditions expérimentales. L'action hydrolytique de l'enzyme de base a été trouvée consistant en deux événements séquentiels: (a) l'hydrolyse de 70% du pH cellulaire total de l'osphatidylcholine sans aucune hémolyse évidente; et (b) l'hydrolyse complète de la phosphatidylcholine restante, suivie de près par une hydrolyse de phosphatidyléthanolamine étendue et enfin avec le début de l'hémolyse, l'attaque sur la phosphatidylserine. À un pH de 7,4 et 10 mM, seulement la phase (a) de Ca2+ a eu lieu. Cependant, une légère élévation du pH de l'incubation à un pH de 8,0 et/ou l'inclusion de 40 mM Ca2+ dans le mélange de réaction a entraîné l'apparition des deux événements (a) et (b). L'ajout de glucose limite l'action de l'enzyme au stade (a) dans toutes les conditions de réaction. Une enquête a montré que l'hémolyse induite enzymatiquement se produit dans des conditions où les niveaux d'ATP intracellulaires ont été abaissés. Des données sont présentées qui suggèrent que la phase (b) est médiée par l'afflux de Ca2+ dans la cellule lorsque les niveaux d'ATP sont faibles. Il est intéressant de noter que la phosphllipase du venin de Naja naja (Pakistan) a donné des résultats similaires à ceux observés avec l'enzyme de base du venin d'Agkistrodon. Cependant, l'enzyme de Crotalus adamanteus et l'enzyme acide également présente dans le venin d'Agkistrodon n'ont produit que légère hydrolyse ou hémolyse dans l'une des conditions étudiées. D'autres espèces d'érythrocytes, par exemple le cochon, le singe, le cochon et le rat, ont été testés, mais seuls ceux du cochon se sont comportés de manière similaire aux cellules humaines. Les érythrocytes de porc, de singe et de rat ont subi une hydrolyse et une hémolyse très limitées. Il est évident que l'utilisation de ces phospholipases pour détecter la localisation des phospholipides dans les membranes érythrocytaires doit être abordée avec prudence. Certains aspects de ce problème sont discutés.
Interactions de sous-unité dans la glycéraldéhyde-3-phosphate déshydrogénase de levure. L'inactivation spontanée de la glycéraldéhyde-3-phosphate déshydrogénase de levure a été trouvée pour s'adapter à un modèle simple à deux états à un pH de 8,5 et 25 degrés. La première étape est une dissociation relativement rapide du tetramère aux dimères avec l'équilibre en faveur du tetramère. En l'absence de NAD+, le dimer est irréversiblement inactivé. L'apoenzyme est assez stable avec une demi-vie pour une perte complète d'activité proportionnelle à la racine carrée de la concentration de l'enzyme. Les perturbations de la structure des protéines (par pH, force ionique et sels spécifiques), qui n'ont pas d'effet sur l'état tetramérique de la molécule, entraînent une altération de la coopérativité de la liaison NAD+, de la réactivité du groupe sulfhydrylique de site actif et de l'activité catalytique de l'enzyme. La modification covalente de deux des quatre groupes sulfhydryliques de site actif a des effets profonds sur l'activité enzymatique qui sont médiées par des changements dans les interactions des sous-unités. Les études d'analyse de la sédimentation et d'hybridation indiquent que l'interaction entre les sous-unités reste forte après la modification covalente. Dans des conditions normales de dialyse physiologique et d'équilibre, la protéine est un tetramère. Des études de dialyse d'équilibre de NAD+ liant à l'enzyme à un pH de 8,5 et 25 degrés révèlent un modèle de coopérativité mixte. Un modèle cohérent avec ces observations et la réactivité de la moitié des sites observée est celui des changements de conformation séquentiels induits par le ligand qui sont transférés à travers des domaines de sous-unités fortement interactifs. Des méthodes pour distinguer les modèles de liaison coopératifs négatifs des mélanges d'enzymes dénaturées et de plusieurs espèces sont discutées.
Études de dispersion cinétique de la lumière sur la dissociation de l'hémoglobine de Lumbricus terrestris. La cinétique de la dissociation induite par le pH de l'hémoglobine 3 X 10(6) mol de Lumbricus terrestris (le ver terrestre) a été étudiée dans un appareil à flux arrêté diffusant la lumière. Les données de dissociation dépendant du ligand étaient bien adaptées par un modèle séquentiel simple. Les données pour la CO et l'oxygémoglobine sont cohérentes avec Hb12 conduit à 2Hb6 conduit à 12Hb. La méthémoglobine à pH 7 semble être hexamérique et la dissociation est cohérente avec le modèle: Hb6 conduit à 6Hb. Dans un schéma de décomposition séquentielle pour lequel les changements de diffusion de la lumière sont surveillés, les quantités relatives de phase rapide et lente sont déterminées par les constantes de vitesse ainsi que les poids moléculaires des espèces intermédiaires. L'attribution de l'intermédiaire hexamérique est soutenue par une étude de la sensibilité des courbes cinétiques théoriques aux poids moléculaires des intermédiaires. Cette attribution est également soutenue par ce qui suit: (1) le même modèle correspondra aux données pour l'oxygène et la CO-hémoglobine à toutes les trois températures (une variation de 24 à 29 fois dans les constantes de fréquence), (2) les preuves de la microscopie électronique montrent des formes hexamériques, et (3) la méthémoglobine est apparemment stable en tant qu'hexamère à pH 7. Lorsque le CO remplace l'O2 en tant que ligand, le taux de dissociation augmente de quatre. Le met est environ 20 fois plus rapide que le taux initial de dissociation de l'oxyémoglobine, mais peut-être plus pertinent pour comparer la dissociation de l'hexamère, le taux de rencontre était respectivement 100 fois et 500 fois plus rapide que celui des formes hexamériques supposées de la CO- et de l'oxyémoglobine. Les énergies d'activation pour le dodecamer à la dissociation hexamère et pour la dissociation de l'hexamère à des formes plus petites étaient d'environ 30 kcal / mol pour l'oxy-, CO-, et la méthémoglobine.
La réduction réversible de la méthomyoglobine de cheval par le complexe de fer (II) de trans-1,2-diaminocyclohexane-N,N,N,n-tétraacétate. La réduction de la méthymoglobine par le complexe de fer (II) de trans-1,2-diaminocyclohexane-N,N,N'N'-tetraacétate (FeCDTA2-) a été étudiée. La constante d'équilibre, mesurée par spectrophotométrie, est de 0,21 avec un potentiel de réduction résultant de 0,050 V pour Mb0. La constante de taux pour la réduction est de 28 M-1 sec-1 avec un deltaH ++ de 13 kcal M-1 et deltaS ++ de -11 eu. Les deux CN- et OH- inhibent la réduction en raison de la réactivité relativement faible de la cyanométhymoglobine (Mb+CN-) et de la méthyglobine ionisée (Mb+OH-). La constante de taux pour la réduction de Mb+CN- par FeCDTA2- est de 4,0 X 10(-2) M-1 sec-1 et celle pour la réduction de Mb+OH- est de 4,8 M-1 sec-1. Le complexe d'oxyde nitrique de la méthymyoglobine est réduit à une constante de 10 M-1 sec-1. Les cinétiques de l'oxydation de l'oxymyoglobine par FeCDTA- ont été étudiées. Les données sont cohérentes avec un mécanisme où l'oxydation se produit entièrement à travers la forme de déoxy. Une constante de taux de 1,45 X 10(2) M-1 sec-1 a été calculée pour l'oxydation de la déoxymyoglobine par FeCDTA-, en constante d'équilibre et constante de taux de réduction. Les données ci-dessus sont discutées en termes d'une simple réaction de réduction de la sphère extérieure.
Constitution et propriétés des membranes axiales des nerfs crustacés. La purification des membranes axonales des crustacés a été suivie par la mesure de l'enrichissement en [3H] capacité de liaison des tétrodotoxines et en Na+, activité K+-ATPase. Une caractéristique de ces membranes est leur teneur élevée en lipides et leur faible teneur en protéines par rapport aux autres types de membranes plasmatiques. La membrane axonale contient des protéines semblables à la myosine, à l'actine, à la tropomyosine et à la tubuline. Il contient également Na+, K+-ATPase et acétylcholinestérase. Les poids moléculaires de ces deux enzymes après la solubilisation sont respectivement 280 000 et 270 000. Les poids moléculaires des sous-unités catalytiques sont de 96 000 pour l'ATPase et de 71 000 pour l'acétylcholinestérase. Nous avons confirmé la présence d’un composant liant la nicotine dans la membrane axonale du lobster, mais nous n’avons pas pu trouver [3H] nicotine liant les membranes axonales du crabe. Le lien avec les membranes axonales og du canal de sodium, a été étudié en détail. La constante de dissociation pour la liaison de [3H]tétrodotoxine au récepteur de membrane axonale est de 2,9 nM à pH 7,4. La concentration du récepteur de la tétrodotoxine dans les membranes de crustacés est d'environ 10 pmol/mg de protéine de membrane, 7 fois moins que l'acétylcholinestérase, 30 fois moins que le Na+, K+-ATPase, et 30 fois moins que le composant liant la nicotine dans la membrane de lobster. Une estimation raisonnable indique qu'environ une chaîne de peptides sur 1000 constitue la partie liant la tétrodotoxine du canal de sodium dans la membrane axonale. La veratridine, qui agit sélectivement sur la perméabilité du sodium au repos, se lie à la partie phospholipidique de la membrane axonale. [3H]La veratridine se lie aux membranes parallèlement à l'effet électrophysiologique. La veratridine et la tétrodotoxine ont des sites de récepteurs différents. Bien que la tétrodotoxine puisse repolariser la membrane excitable d'un axeon géant dépolarisé par la veratridine, la veratridine n'affecte pas la liaison de la [3H]tétrodotoxine aux membranes axonales purifiées. De même, la tétrodotoxine n'affecte pas la liaison de la [3H]veratridine aux membranes axonales. La neurotoxine Scorpion I, une toxine présynaptique qui affecte à la fois les canaux Na+ et K+, n’interfère pas avec la liaison de la tétrodotoxine [3H] ou de la veratridine [3H] aux membranes axonales. La tétrodotoxine, la veratridine et la neurotoxine du scorpion I, qui ont en commun la perturbation du fonctionnement normal du canal de sodium, agissent sur trois types différents de sites récepteurs.
Régulation de la fixation de l’azote. mutants de Klebsiella pneumoniae. Une nouvelle procédure est décrite pour la sélection des mutants déprimés par l'azote en fonction de la méthode de Brenchley et al. (Brenchley, J.E., Prival, M.J. et Magasanik, B. (1973) J. Biol.1) Une nouvelle procédure est décrite pour la sélection des mutants déprimés par l'azote en fonction de la méthode de Brenchley et al. (Brenchley, J.E., Prival, M.J. et Magasanik, B. (1973) J. Biol. Chem. 248, 6122-6128) pour l'isolement des mutants constitutifs de l'histidase d'une bactérie non fixante N2. Les niveaux d'azote des nouveaux mutants en présence de NH4+ étaient aussi élevés que 100% de l'activité d'azote détectée en l'absence de NH4+. La caractérisation biochimique de ces mutants de fixation d'azote (nif) dépressés révèle qu'ils tombent en trois classes. Trois mutants (stamines SK-24, 28 et 29), nécessitant du glutamate pour la croissance, synthétisent constitutivement l'azote et la glutamine synthétase (en présence de NH4+). Une deuxième classe de mutants (stamines SK-27 et 37) nécessitant de la glutamine pour la croissance produit des niveaux d'activité de l'azote réprimés et synthétise une protéine de la glutamine synthétase catalytique inactive, déterminée immunologiquement. Une troisième classe de mutants glutamine-exigeant, l'azote-déprimés mutants (stamme SK-25 et 26) ne synthétise ni une enzyme de synthétase de la glutamine catalytiquement active ni une protéine de la synthétase de la glutamine immunologiquement-réactive. L'analyse de la complémentation F-prime révèle que les souches mutantes SK-25, 26, 27, 37 cartographient un segment du chromosome Klebsiella correspondant à la région codant pour la synthétase de la glutamine. Étant donné que les souches mutantes SK-27 et SK-37 produisent la protéine de la glutamine synthétase inactive, il est conclu que ces mutations cartographient le gène structurel de la glutamine synthétase.
La réaction entre le radical superoxyde et le cytochrome c. Le radical anion superoxyde (O2-) réagit avec le ferricytochrome c pour former le ferrocytochrome c. Aucun complexe intermédiaire n'est observable.1. Le radical anion superoxyde (O2-) réagit avec le ferricytochrome c pour former le ferrocytochrome c. Aucun complexe intermédiaire n'est observable. Aucune réaction n'a pu être détectée entre O2 et le ferrocytochrome c. À 20 degrés C, la constante de vitesse pour la réaction à un pH de 4,7 à 6,7 est de 1,4-10(6) M-1. S -1 et au fur et à mesure que le pH augmente au-dessus de 6,7, la constante de vitesse diminue constamment. La dépendance au pH est la même pour le cœur de thon et le cytochrome c. Aucune réaction ne pouvait être démontrée entre O2- et la forme du cytochrome c qui existe au-dessus du pH d'environ 9,2. La dépendance de la constante de taux sur le pH peut être expliquée si le cytochrome c a des pK de 7,45 et 9,2, et O2- réagit avec la forme présente en dessous du pH de 7,45 avec k = 1,4-10(6) M-1 - S-1, la forme au-dessus du pH de 7,45 avec k = 3,0-10(5) M-1 - S-1, et la forme présente au-dessus du pH de 9,2 avec k = 0,3. La réaction a une énergie d'activation de 20 kJ mol-1 et une enthalpie d'activation à 25 degrés C de 18 kJ mol-1 à la fois au-dessus et en dessous du pH de 7,45. Il est suggéré que O2- peut réduire le cytochrome c à travers une piste composée d'acides aminés aromatiques, et que peu de réarrangement des protéines est nécessaire pour la formation du complexe activé. Aucune réduction du ferricytochrome c par les radicaux HO2 ne pouvait être démontrée à pH 1.2-6.2, mais à pH 5.3, les radicaux HO2 oxydent le ferricytochrome c avec une constante de taux d'environ 5-10(5)-5-10(6) M-1 - S-1.
Identification de la phase mus 120 dans la décomposition de la fluorescence retardée dans les chloroplastes d'épinards et les particules de sous-chloroplastes comme réaction de retour intrinsèque. La dépendance du niveau de cette phase sur le pH interne des thylacoïdes. Après un flash laser de 500 souris, une phase de 120 souris dans la décomposition de la fluorescence retardée est visible dans une variété de circonstances dans les chloroplastes d'épinards et les particules de sous-chloroplastes enrichies dans le Photosystem II préparées par le moyen de la digitonine. Le niveau de cette phase est élevé en cas d'inhibition de l'évolution de l'oxygène du côté donneur du Photosystem II. Comparaison avec les résultats de Babcock et Sauer (1975) Biochim. Acta 376, 329-344, indique que leur signal EPR IIf, qu’ils supposent être dû à Z+, le premier donneur secondaire oxydé du Photosystem II, est bien corrélé à une grande amplitude de notre phase mus 120. Nous expliquons notre phase de 120 souris par la réaction rétro intrinsèque du centre de réaction excité en présence de Z+, tel que prédit par Van Gorkom et Donze (1973) Photochem. 17, 333 à 342. L'état redox de Z+ dépend du pH interne des thylacoïdes. Les résultats sur l'effet du pH dans la région des souris sont comparés à ceux obtenus dans la région des ms.
Changements induits par la lumière de l'absorption et de la résonance de spin électronique dans les petites particules du photosystème II. Les composants du centre de réaction du photosystème II ont été étudiés dans de petites particules du système II préparées avec de la digitonine. Lors de l'éclairage, la réduction de l'accepteur primaire a été indiquée par des changements d'absorption dus à la réduction d'une plastoquinone à l'anion de semi-quinone et par un petit changement bleu des bandes d'absorption près de 545 nm (C550) et 685 nm. Le rapport semi-quinone/chlorophylle était compris entre 1/20 et 1/70 dans diverses préparations. Le donneur d'électrons terminal dans cette réaction n'a pas causé de grands changements d'absorption, mais sa forme oxydée a été révélée par un signal de résonance de spin électronique (ESR) jusqu'ici inconnu, qui avait certaines propriétés du signal bien connu II, mais une largeur de ligne et une valeur g beaucoup plus proche de celles du signal I. Après l'obscurcissement, l'absorption et les changements ESR se sont décomposés ensemble dans une réaction cyclique ou rétroactive qui a été stimulée par 3-(3,4 dichlorophenyl)-1,1-diméthylurée. Le donneur pourrait être oxydé par le ferricyanide dans l'obscurité. L'éclairage en présence de ferricyanide induit l'absorption et les modifications de l'ESR, rapidement inversées lors de l'obscurcissement, ce qui peut être attribué à l'oxydation d'une chlorophylle un dimer, éventuellement le donneur d'électrons primaire du photosystème II. En outre, un signal ESR avec une largeur de ligne de 15 à 20 gauss et une dégradation sombre plus lente ont été observés, ce qui peut avoir été causé par un donneur secondaire.
Réactions enzymatiques des hydroperoxydes d'acides gras dans les extraits de tuber de pomme de terre. Conversion des acides 9- et 13-hydroperoxy-octadécadienoïques en acides monohydroxydiénoïques, dérivés d'acides époxyhydroxy et trihydroxymonoïques. Extracts bruts et préparations enzymatiques partiellement purifiées des tubercules de pomme de terre catalyse, au pH 5-7, la conversion des hydroperoxydes d'acide linoléique en une gamme de dérivés d'acides gras oxygénés.1. Extracts bruts et préparations enzymatiques partiellement purifiées des tubercules de pomme de terre catalyse, au pH 5-7, la conversion des hydroperoxydes d'acide linoléique en une gamme de dérivés d'acides gras oxygénés.2. Les isomères 9-D- et 13-L-hydroperoxyde sont convertis à des taux similaires en produits équivalents (isomères). Les principaux produits de l'isomère 13-hydroperoxyde ont été identifiés comme le dérivé monohydroxydiénoïque correspondant, threo-11-hydroxy-trans12,13-époxy-octadec-cis9-énoïque et 9,12,13-trihydroxy-octadec-trans10-énoïque. Les produits correspondants du 9-hydroperoxyde étaient l'acide monohydroxydiénoïque, l'acide 9,10-époxy-11-hydroxy-octadec-12-énoïque et l'acide 9,10,13-trihydroxy-octadec-11-énoïque. Aucune séparation des activités formant les différents produits n'a été obtenue par la purification partielle des extraits enzymatiques. La formation du produit n'a pas été affectée par les réactifs EDTA, CN-, sulfydryl ou glutathion, mais a été réduite par la cuisson des extraits. Ce système est comparé à la formation enzymatique 9-hydroperoxyde spécifique des dérivés de l'éther divinyl par des extraits de pommes de terre.
Purification partielle et propriétés de la phosphohydrolase de phosphatidate microsomique provenant du foie de rat. La phosphatidate microsomique phosphohydrolase (phosphatidate phosphatase EC 3.1.3.4) a été solubilisée et fractionnée pour produire au moins deux fractions enzymatiquement actives distinctes. L'un, désigné FA, était non spécifique, avait un Km relativement élevé pour l'acide phosphatidique et était insensible à l'inhibition par le diacylglycérol. La deuxième fraction, FB, était spécifique aux phosphatidates, avait un Km faible et était inhibée, non concurrentiellement, par le diacylglycérol. FA a montré une courbe d'activité de substrat sigmoïde. Le FB isolé agrégé en particules d'environ 10(6) en l'absence de sels et pourrait être dissocié par l'ajout de cations monovalentes à la force ionique de 0,4-0,6 à environ 2-10(5) daltons et ainsi doublé son activité. La dissociation était dépendante du temps et de la température. C est un inhibiteur. Les ions divalents n'étaient pas nécessaires pour l'activité de la FA ou de la FB et étaient inhibés à des concentrations supérieures à 1 mM.
Les acides acides, XLVII 12alpha-hydroxylation des précurseurs des acides biliaires allo par les microsomes du foie de lapin. Les préparations microsomiques du foie de lapin enrichies de 0,1 mM de NADPH favorisent efficacement l'hydroxylation de [3beta-3H]- ou [24-14C] de l'acide alochénodeoxycholique ou [5alpha,6alpha-3H2]5alpha-cholestane-3alpha,7alpha-diol à leurs dérivés 12alpha-hydroxyl respectifs à des rendements d'environ 25 ou 65% en 60 min. Les exigences pour l'activité de la 12alpha-hydroxylase microsomique du foie de lapin sont similaires à celles des microsomes du foie de rat. Parmi un certain nombre d'inhibiteurs enzymatiques étudiés, seul le p-chloromércuribenzoate a démontré une capacité marquée à inhiber la réaction avec un substrat tritié. Il n'y a pas eu de différence dans la quantité de produit produit à partir de l'acide tritié ou de l'acide 14C-étiqueté. Aucune différence de sexe claire n'a été trouvée dans l'activité de l'enzyme, ni aucune différence notable n'a été notée dans l'activité de l'enzyme entre les animaux matures et immatures.
Purification partielle et propriétés d'une aldehyde déshydrogénase induite par le phénobarbital du foie de rat. Les propriétés de la déhydrogénase d'aldéhyde cytoplasmique induite par le phénobarbital (EC 1.2.1.3) ont été étudiées chez le foie de rat. Des niveaux 7 à 12 fois plus élevés ont été observés dans les activités cytoplasmiques après le traitement au phénobarbital dans le réacteur par rapport aux animaux non réacteurs avec des concentrations élevées d'acétaldéhyde (18 mM) et de propionaldehyde (9 mM). Aucune différence n'a été trouvée avec 0,12 mM d'acétaldéhyde, 2 mM de glycolaldéhyde, 6 mM de formaldéhyde ou 0,5 mM d'aldéhyde de bêtaine. Le groupe de réacteurs avait également une activité légèrement plus élevée dans la fraction mitochondriale avec les concentrations élevées d'acétaldéhyde et de propionadéhyde. Dans la fraction microsomique, les activités n'ont montré aucune différence à aucune concentration de substrat. Une aldehyde déshydrogénase induite a été purifiée 70 fois par des techniques chromatographiques. Il avait des propriétés moléculaires et enzymatiques différentes de la principale enzyme à haute teneur en km normalement présente dans le cytoplasme du foie de rat. Le pI de l'enzyme induite était d'environ 7,0 mesuré par focalisation isoélectrique. Il a été actif avec plusieurs aldehydes alifatiques et aromatiques mais pas avec le formaldéhyde, le glycolaldéhyde ou le D-glycéraldéhyde. Les valeurs de Km pour le propionaldehyde et l'acétaldéhyde se trouvaient dans la gamme millimolaire. Des concentrations millimolaires d'aldéhydes aromatiques ont entraîné une forte inhibition du substrat. L'enzyme a été inhibée par des concentrations submicromolaires de disulfiram. L'estrone, la déoxycorticosterone, la progestérone et le diéthylstilbestrol ont également affecté l'activité de l'enzyme.
Cholinestérases des tissus végétaux. Caractérisation préliminaire des enzymes de Solanum melongena L. et Zea mays L. Les enzymes capables d’hydrolyser les esters de thiocholine ont été testées dans les extraits de Solanum melongena L. (plante d’œuf) et de Zea Mays L. (céréales). Les enzymes des deux espèces sont inhibées par les anticholinestérases néostigmine, physiostigmine, et 284c51 et par AMO-1618, un retardant de la croissance des plantes et ils ont tous les deux un pH optimal près de pH 8,0. L'enzyme provenant de la plante ovarienne est maximalement active à une concentration de substrat de 0,15 mM d'acétylthiocholine et est inhibée à des concentrations de substrat plus élevées. Sur la base de cette dernière propriété, de l'ampleur de l'inhibition par les différents inhibiteurs, et de la spécificité du substrat, nous concluons que l'enzyme de la plante ovarienne, mais pas celle du maïs, est une cholinestérase.
Comportement de la phosphatase acide soluble et immobilisée dans les milieux hydro-organiques. L'hydrolyse du phosphate p-nitrophényl par la phosphatase d'acide germinal du blé (phosphohydrolase monoestère orthophosphorique, EC 3.1.3.2) a été étudiée dans des mélanges de tampons aquatiques avec de l'acétone, du dioxane et de l'acétonitrile. L'enzyme était soit en solution libre, soit immobilisée sur un support pelliculaire composé d'une couche carbonaceuse poreuse sur des perles de verre solides. L'activité enzymatique la plus élevée a été obtenue dans l'acétone et l'acetonitrile mélangés avec le tampon de citrate sur une large gamme de concentration de solvant organique. Dans 50% (v/v) de l'acétone, V et Km de l'enzyme immobilisée étaient environ la moitié des valeurs dans le tampon aqueux propre, mais le Ki pour le phosphate inorganique était inchangé. Dans les mélanges de 50% (v/v) de divers solvants et tampons de citrate ayant un pH différent, l'activité enzymatique a été trouvée dépendant du pH du composant tampon aqueux plutôt que du pH du mélange hydro-organique mesuré avec l'électrode de verre-calomelle. Les taux relativement élevés de libération de p-nitrophénol en présence de glucose même à des concentrations élevées de solvants organiques suggèrent que la transphosphorylation est facilitée à faible activité de l'eau.
Purification et certaines propriétés enzymatiques de la chitosanase du Bacillus R-4 qui lisse les parois cellulaires du Rhizopus. Une souche de Bacillus sp (Bacillus R-4) produit une protéase et une carbohydrolase qui ont tous les deux la capacité de lisser les parois cellulaires de Rhizopus. Parmi les enzymes, la carbohydrolase a été purifiée à un état ultracentrifuge et électrophorétique homogène, et identifiée comme une chitosanase. L'enzyme était active sur le glycol chitosan ainsi que sur le chitosan. Le poids moléculaire de l'enzyme purifiée a été estimé à 31 000 et le point isoélectrique à un pH de 8,30. L'enzyme était la plus active à pH 5,6 et à 40 degrés C avec soit la paroi cellulaire de Rhizopus ou le glycol chitosane comme substrat, et était stable sur une plage de pH 4,5 à 7,5 à 40 degrés C pendant 3 h. L'activité a été perdue par les réactifs sulfhydryl et restaurée par soit réduit glutathion de L-cystéine. Une diminution soudaine de la viscosité du mélange de réaction a suggéré une scission du chitosan par cette enzyme.
Études de spécificité sur les alpha-mannosidases utilisant des oligosaccharides provenant de l'urine de la mannosidose comme substrates. Les oligosaccharides contenant des résidus de mannose liés alpha (1 conduit à 2)-, alpha (1 conduit à 3)-, et alpha (1 conduit à 6)-résidus de mannose terminaux non réducteurs, isolés des urines de mannosidose humaine et bovine, ont été utilisés comme substrates pour tester les spécificités des alpha-mannosidases acides isolées du foie humain et bovin. Les enzymes libèrent tous les résidus de mannose liés à l'alpha de chaque oligosaccharide et étaient les plus efficaces sur le plus petit substrat. L'enzyme A dans chaque cas était moins active sur les oligosaccharides que l'alpha-mannosidase B2, bien que la valeur apparente de Km pour les substrates soit la même pour chaque enzyme. Les alpha-mannosidases acides humains ont également été trouvées plus actives sur les substrates isolés de l'homme plutôt que sur l'urine de la mannosidose bovine. L'alpha-mannosidase C humaine, qui a un pH neutre optimal lorsqu'elle est analysée avec un substrat synthétique, n'a pas hydrolysé aucun des oligosaccharides à un pH neutre, mais a été trouvée active à un pH acide.
Adenosine triphosphatase stimulée par le calcium dans la fraction microsomique du germe dentaire du fœtus de porc. La caractérisation et la localisation d'une Ca(2+)-ATPase (ATP phosphohydrolase, EC 3.6.1.3) dans le germe dentaire du fœtus porcine sont rapportées. Cette enzyme, une fraction microsomique, est activée de préférence par Ca(2+). En présence de 0,5 mM d'ATP, l'activité enzymatique maximale est obtenue à 0,5--1,0 mM de CaCl2. Le taux maximal d'hydrolyse de l'ATP est d'environ 20 mumol par heure par mg de protéine comme la préparation enzymatique est utilisée ici. À une concentration optimale de Ca(2+), la Mg(2+) a un effet inhibiteur. L'enzyme n'a pas besoin de Na+ et/ou K+ pour l'activation par Ca(2+). D'autres triphosphates nucléotidiques peuvent servir de substrat, mais V pour ATP est le plus élevé. Le Km pour l'ATP est de 8,85 - 10(-5) M. Le pH optimal pour l'activation de Ca(2+) de l'enzyme est d'environ 9,2. Les inhibiteurs bien connus de (Na+ + K+)-ATPase, de l'ATPase mitochondriale et de la Ca(2+)-ATPase dans l'érythrocyte n'inhibent pas l'enzyme. Dans l'ordre sous-cellulaire, on peut supposer que l'enzyme est localisée dans la fraction du réticulum endoplasmique lisse contenant des fragments de membrane cellulaire et du corps de Golgi et dans l'ordre tissulaire dans l'organe émail contenant une couche d'améloblast, un stratum intermédiaire et un réticulum stellaire.
Préparation et caractérisation d'un dérivé immobilisé enzymatiquement actif de la myosine. La myosine musculaire squelettique purifiée (EC 3.6.1.3) a été liée de manière covalente à la sépharose 4B par la procédure du bromure de cyanogène. Le complexe résultant, la sépharose-myosine, possède une activité adénosine triphosphatase et est relativement stable pendant de longues périodes de temps. Dans des conditions de liaison optimales, environ 33% de l'activité ATPase spécifique de la myosine liée est conservée. L'électrophorèse du gel polyacrylamide des polypeptides libérés à partir de la sépharose-myosine dénaturée indique que 85% de la myosine est attachée aux perles d'agarose à travers les chaînes lourdes et le reste à travers les chaînes légères, conformément aux prédictions de liaison et de libération basées soit sur la teneur en lysine, soit sur les poids moléculaires des sous-unités de thémyosine. L'adénosine triphosphatase de la myosine immobilisée a été étudiée dans des conditions de pH variable, de résistance ionique et de concentration de cation. Les profils ATPase de la myosine immobilisée sont assez similaires à ceux de la myosine libre, mais des différences subtiles sont trouvées. La sépharose-myosine ATPase n'est pas aussi sensible que la myosine aux altérations de la concentration de sel et la KM apparente est environ deux fois plus élevée que celle de la myosine. Ces différences sont probablement dues à la modification chimique dans la région du site (s) d'attachement aux boules d'agarose et aux limitations d'hydratation et de diffusion imposées par la matrice d'agarose polymère.
Étiquetage radioactif et localisation de groupes thiols spécifiques dans la myosine provenant des muscles rapide, lent et cardiaque. Sur la base de l'incorporation de N-éthylmaléimide radioactivement étiqueté, les groupes thiol facilement réactifs de myosine isolée (EC 3.6.1.3) provenant des muscles rapide, lent et cardiaque pourraient être classés en 3 types.1. Toutes les 3 myosines contiennent 2 thiol-1, 2 thiol-2 et un nombre variable de groupes thiol-3 par molécule. Les groupes thiol-1 et thiol-2, qui sont essentiels au fonctionnement de l'ATPase stimulée par K+, sont situés dans les chaînes lourdes dans les 3 types de myosine. La variation du schéma d'incorporation de la N-éthylmaleimide sur les 3 classes du groupe thiol dans des conditions d'état stable de Mg(2+) - l'hydrolyse ATP a permis de caractériser différentes conformations de certains intermédiaires de réaction. Dans les trois types de myosine, le cycle hydrolytique de Mg(2+) - ATP a été trouvé pour être contrôlé par la même étape à 25 degrés C. Dans les trois cas, cette étape de limitation de la vitesse est modifiée de la même manière par la baisse de la température. En utilisant les poids moléculaires déterminés chimiquement pour les chaînes légères de myosine, leur stéchiométrie a été trouvée sur la base de l'électrophorèse du sulfate de dodécyl sodium pour être de 1,2 : 2.1 : 0,8 pour la chaîne légère-1: chaîne légère-2: chaîne légère-3 par molécule de myosine rapide, de 2,0 : 1,9 pour la chaîne légère-1: chaîne légère-2 par molécule de myosine lente et de 1,9 : 1,9 pour la chaîne légère-1: chaîne légère-2 par molécule de myosine cardiaque. Cette différence qualitative dans la composition de la sous-unité légère entre les deux types de myosine rapide et lente ne se reflète pas dans les petites variations des caractéristiques présentées par les myosines isolées, mais semble plutôt être liée à leurs activités myofibrillaires respectives ATPase.
Le glutathion réductase. Études de la cinétique et de la stabilité de l'enzyme en fonction du pH et de la concentration de sel. Les dépendances du pH de la constante Michaelis apparente pour le glutathion oxydé et le chiffre d'affaires apparent de la glutathion-réductase de levure (EC 1.6.4.2) ont été déterminés à une concentration fixe de 0,1 mM de NADPH dans la plage de pH de 4,5 à 8,0.1. Les dépendances du pH de la constante Michaelis apparente pour le glutathion oxydé et le chiffre d'affaires apparent de la glutathion-réductase de levure (EC 1.6.4.2) ont été déterminés à une concentration fixe de 0,1 mM de NADPH dans la plage de pH 4,5 - 8,0. Entre 5,5 et 7,6, les deux paramètres sont relativement constants. L'effet principal du faible pH sur la cinétique de la réaction enzymatique catalysée est l'observation d'une inhibition du substrat dépendant du pH par le glutathion oxydé à un pH inférieur ou égal à 7, ce qui a été montré pour corréler avec la liaison du glutathion oxydé à la forme oxydée de l'enzyme. L'activité catalytique de la glutathion-réductase de levure à un pH de 5,5 est affectée par la concentration de tampon d'acétate de sodium. La stabilité des formes oxydées et réduites de l'enzyme à un pH de 5,5 et 25 degrés C en l'absence d'albumine sérique bovine a été étudiée en fonction de la concentration d'acétate de sodium. Les résultats montrent que l'activation de l'activité catalytique de l'enzyme à faible concentration d'acétate de sodium est corrélée avec l'effet de l'acétate de sodium sur une forme réduite de l'enzyme. En revanche, l'inhibition de l'activité catalytique de l'enzyme à une concentration élevée d'acétate de sodium est corrélée à un effet de l'acétate de sodium sur la forme oxydée de l'enzyme.
Caractéristiques de la forme déphosphorylée de la phosphorylase purifiée du foie de rat et mesure de son activité dans les préparations du foie brut. La forme phosphorylée de la glycogène phosphorylase hépatique (alpha-1,4-glucan : orthophosphate alpha-glucosyl-transferase, EC 2.4.1.1) (phosphorylase a) est active et facilement mesurable tandis que la forme déphosphorylée (phosphorylase b), contrairement à l'enzyme musculaire, a été rapportée pour être essentiellement inactive même en présence d'AMP. Nous avons purifié les deux formes de phosphorylase du foie de rat et étudié les caractéristiques de chacune. L'activité de la phosphorylase b peut être mesurée avec nos conditions d'essai. La phosphorylase b obtenue a été stimulée par des concentrations élevées de sulfate, et était un substrat pour la phosphorylase kinase musculaire tandis que la phosphorylase a a a été inhibée par le sulfate, et était un substrat pour la phosphorylase hépatique. Le substrat liant à la phosphorylase b était faible (KM glycogène = 2,5 mM, glucose-1-P = 250 mM) par rapport à la phosphorylase a (KM glycogène = 1,8 mM, KM glucose-1-P = 0,7 mM). Le foie phosphorylase b était actif en l'absence d'AMP. Cependant, AMP a abaissé le KM pour le glucose-1-P à 80 mM pour la phosphorylase b purifiée et à 60 mM pour l'enzyme dans l'extrait brut (Ka = 0,5 mM). En utilisant des concentrations appropriées de substrat, de tampon et d'AMP, des conditions d'essai ont été développées qui permettent de déterminer la phosphorylase a et 90% de l'activité de la phosphorylase b dans les extraits du foie. L'interconversion des deux formes peut être démontrée in vivo (sous stimulation aiguë) et in vitro avec peu de changement dans l'activité totale. Une diminution de l'activité totale de la phosphorylase a été observée après une famine prolongée et dans le diabète.
Multiples formes de caséine kinase provenant des érythrocytes de lapin. Deux caséine kinases érythrocyte lapin, GTP: caséine kinase I et GTP: caséine kinase II, ont été purifiés 29 000- et 47 000- fois, respectivement. Des études utilisant la centrifugation gradient de densité de saccharose indiquent que la kinase I a un poids moléculaire d'environ 9.5 - 10(5) (25 S) et la kinase II d'environ 1.4 - 10(6) (32 S). Ces enzymes peuvent utiliser soit ATP ou GTP comme donneur de phosphoryl. Parmi les divers substrats de protéines examinés, ces kinases catalyse la phosphorylation de la caséine supérieure à 50% de phosphorylated phosvitin congruent à 50% de déphosphorylated caséine supérieure à la phosvitine. Les histones, la protamine et l'albumine de sérum bovine sont de mauvais accepteurs de phosphore. Les données cinétiques indiquent que les deux enzymes sont inhibées par des concentrations élevées de substrat de caséine qui peuvent être partiellement soulagées par NaCl. Les deux phosphotransférases nécessitent Mg(2+) pour l'activité et sont optimalement actives à un pH de 9,0. Les enzymes ont des valeurs kilométriques apparentes de 2,5 à 10(-5) M pour GTP, 2 à 10(-5) M pour ATP et 0,4 à 0,6 mg/ml pour la caséine. L'incorporation du phosphate terminal de GTP dans la caséine catalyse par ces enzymes est inhibée à des degrés variables par ATP, ITP, ADP et GDP mais pas par UTP, CTP, GMP, adénosine 3':5'-monophosphate cyclique et guanosine 3':5'-monophosphate cyclique. En outre, le NaF et l'acide 2,3-diphosphoglycérique ont également été trouvés pour inhiber l'activité des deux kinases. L’effet du 2,3-diphosphoglycérate est intéressant et suggère que ce métabolite peut réguler l’activité des kinases de caséine dans les globules rouges.
Études cinétiques et effets des anions sur la créatine phosphokinase provenant du muscle squelettique du singe rhésus (Macaca mulatta). Une procédure de purification pour la créatine kinase (EC 2.7.3.2) du muscle du singe35-170 muequiv H+/mg de protéine par minute à 30 degrés C et un rendement d'environ 0,5 g/kg de muscle. En supposant la cinétique de l'équilibre, la liaison synergique des substrats sur un site catalytique est trouvée pour les réactions avant et arrière. Les constantes cinétiques pour la liaison de chaque substrat à l'enzyme libre et au complexe enzyme-seconde substrat sont déterminées et comparées à celles de l'enzyme d'autres espèces. L'inhibition par de petits anions est déterminée en présence de différentes combinaisons de substrates et de produits. SO4(2-) inhibe par simple inhibition concurrentielle et se lie probablement au site du groupe phosphorique transférable. L'inhibition par NO3-, NO2-, SCN- et Cl- est plus complexe et ces ions sont suggérés pour imiter le groupe phosphorique transférable dans un complexe d'état de transition planaire. Ces anions stabilisent le complexe mort-end, l'enzyme-créatine-MgADP, qui manque du groupe phosphorique transférable. Les effets de ces anions sur les constantes de dissociation des complexes enzyme-substrat sont rapportés et sont conformes à l'hypothèse ci-dessus. Le complexe mort-end en l'absence d'anion ne protège pas le groupe thiol essentiel contre l'inhibition par l'iodoacétamide. L'ajout de NO3 ou de Cl- au complexe de fin morte ou à un mélange d'équilibre de substrat sans anion confère une protection. Le groupe thiol essentiel est inhibé par l'iodoacétamide à un taux qui est essentiellement indépendant du pH au-dessus de la plage de stabilité normale de l'enzyme. Contrairement à notre rapport précédent, cette indépendance du pH n'est pas altérée par la présence d'un complexe mort-end, de la créatine et du MgADP, de la présence ou de l'absence d'anions ou de la présence d'un mélange d'équilibre de substrat. Il est déduit que le groupe thiol «essentiel» de l'enzyme du singe possède essentiellement les mêmes propriétés que celle de l'enzyme du lapin. En conséquence, les conclusions faites sur le rôle de ce groupe basé sur notre travail antérieur sur l'enzyme des singes ne sont plus valables. Les résultats présentés sont compatibles avec le groupe thiol essentiel jouant un rôle de conformation dans le processus catalytique.
Études sur les cellules corticales rénaux de rat kallikrein. I. Séparation et mesure. Une technique a été développée pour séparer et mesurer le kallikrein dans une population hétérogène de cellules corticales rénaux de rat en suspension. Après que les reins des rats ont été perfusés in situ chez les rats anesthésiés, des suspensions de cellules corticales viables ont été obtenues. Les cellules ont été suspendues dans un tampon de saccharose/Tris contenant 0,5% de désoxycholate, homogénéisées, centrifugées, dialysiques et gelées sur Sephadex G-25. La chromatographie de colonne sur la cellulose DEAE a entraîné un seul pic d'activité de l'esterase entre 0,20 et 0,25 M de NaCl / tampon de phosphate de sodium. L'élation ultérieure a donné lieu à une estérase alcaline identique à la kallikréine isolée de l'urine de rat, en ce qui concerne le pH optimal, les effets des inhibiteurs, l'activité des bioanalyses et les propriétés immunologiques. Les rendements calculés représentaient environ 70% de l'activité totale de l'esterase présente dans les homogénates cellulaires mères. Les récupérations d'un kallikrein urinaire de rat purifié ajouté aux homogénates cellulaires, aux colonnes de cellulose DEAE, ou aux eluates des colonnes se situaient entre 83 et 108 % (en moyenne 96 %). En utilisant cette technique, il a été constaté que la quantité d'activité de kallikrein présente dans les cellules corticales rénales non incubées variait de 0,6-10(-2) à 4,6 - 10(-2) alpha-N-tosyl-L-arginine ester méthyl (Tos-Arg-OMe) unités d'esterase par 10(8) cellules. Cependant, les cellules incubées dans un milieu nutritif à 37 degrés C pendant 3-8 heures ne contenaient pas d'activité mesurable de kallikrein, alors que le milieu environnant avait une activité de kallikrein qui pourrait être significativement augmentée par l'aldostérone et diminuée par la spironolactone.
Études sur le transfert d'électrons entre l'électrode de mercure et l'hémoprotéine. Le comportement électrochimique du ferricytochrome c, de la méthymyoglobine et de la méthémoglobine a été étudié à l'aide de la d.c., de la a.c. et de la polarographie de pouls différentiel, et de l'électrolyse potentielle contrôlée. Les trois hémoproteines produisent d.c. étapes polarographiques, et des pics dans les polarogrammes de pouls différentiel, dont la hauteur est proportionnelle à la concentration. Le transfert de charge est influencé par une forte adsorption. La dépendance de la concentration des polarogrammes a.c. indique des changements structurels dans les molécules adsorbées. Les produits de réduction de l'électrolyse potentielle contrôlée de la méthymyoglobine et de la méthémoglobine ont des spectres d'absorption identiques aux échantillons de contrôle natif. L'affinité pour l'oxygène et la coopérativité dans l'hémoglobine ne sont pas affectées par la réaction à l'électrode. Le transfert de charge se fait via des molécules adsorbées, déjà réduites, vers des protéines librement diffusables.
La liaison des phosphates organiques à la méta-hémoglobine humaine A. Perturbation de la polymérisation des protéines par des effecteurs. La théorie est présentée concernant la liaison d'un effecteur à deux états d'un accepteur de protéine coexistant en équilibre. Le problème est traité en termes des quatre cas possibles qui spécifient les relations entre le nombre de sites de liaison et les constantes de liaison intrinsèques pertinentes pour les états d'accepteur. Il est démontré qu'une distinction entre ces cas peut être possible sur la base de la forme d'un parcours de concentration d'effecteur non lié par rapport au coefficient d'équilibre constituant qui peut être calculé à partir du coefficient de sédimentation du constituant de la protéine. Particulièrement remarquable à cet égard est la constatation qu'un point de tournant peut exister dans cette parcelle pour des conditions définies avec des systèmes dans lesquels les sites de liaison ne sont pas conservés (et les affinités de liaison sont altérées) sur la formation de polymères. Ce dernier type de système est exemplifié par des études sur la méthhémoglobine A dans l'acétate de sodium 0,25 M, pH 5,4. En l'absence d'effecteurs de phosphate organique ajouté, un équilibre dimer-tetramer fonctionne régie par une constante d'association de 4,15 +/- 0,06 X 10(3) 1/mol, déterminée à partir des résultats de l'équilibre de sédimentation. La corrélation des résultats de la vitesse de sédimentation et de l'équilibre montre que l'addition de l'adénosine 5'-triphosphate (ATP) entraîne sa liaison à un site sur chacune des espèces dimériques (alpha bêta) et tetramériques (alpha bêta)2 avec des constantes de liaison intrinsèques de 1.03-10(3)-1.20-10(3) et 1.1-10(4)-2.1-10(4) 1/mol, respectivement. Il a également été démontré que le 2,3-diphosphoglycérate perturbe l'équilibre dimer-tetramer de manière similaire à l'ATP.
Études de l'étiquette de spin N-terminale sur l'hémoglobine, le ligand et la dépendance au pH. L'hémoglobine humaine a été étiquetée avec 4-isothiocanate-2,2,6,6-tetramethyl-piperdinooxyl, qui est connu pour se lier spécifiquement aux groupes alpha-amino N-terminal des protéines et légèrement aux groupes sulfhydryl réactifs. L'analyse de la résonance de spin électronique (ESR) a indiqué un spectre de cinq lignes partiellement résolu, suggérant que l'étiquette était attachée à au moins deux sites de liaison différents. En utilisant des réactifs de blocage spécifiques avant l'étiquetage de spin, les deux sites de liaison ont été attribués au groupe sulfhydryl de bêta-93 (immobile) et au groupe alpha-amino des valines N-terminales (mobile). Le mouvement relatif du spin à un ensemble de sites de liaison a été restreint indépendamment de l'état de ligation et de pH, tandis que le mouvement à l'autre site a montré une dépendance sur ces paramètres, par exemple les extrémités N-terminales de la déoxyémoglobine marquées par spin ont un mouvement restreint à tous les niveaux de pH étudiés, tandis que ceux de l'oxyémoglobine sont relativement libres de se déplacer à la plage de pH de base, mais deviennent plus restreints dans la plage de pH acide.
Le comportement des holo- et apo-formes de la superoxide bovine dismutase à faible pH. Il a été démontré que la dismutase holo-superoxyde provenant d'érythrocytes bovins subit une modification structurelle réversible dans la plage de pH 3-51. Les modifications spectrales observées lors du changement de la neutralité au pH 2 ont été: une légère atténuation de l'absorption de 680 nm; la perte de l'épaule de 450 nm, visible dans le spectre optique de la protéine native; et une nouvelle bande est apparue à 330 nm. Le dichroisme circulaire à 600 nm a été essentiellement perdu alors qu'une faible bande négative est apparue à environ 380 nm et une bande positive à 310 nm. Le spectre de l'EPR a également été modifié en changeant de la forme native à la forme à faible pH: un parallèle a augmenté d'environ 130 à environ 150 G, le parallèle g est resté inchangé à environ 2,27, et le gm a diminué d'environ 2,09 à environ 2,08. La longueur de ligne apparente est restée essentiellement constante.4. Les spectres PMR à haute résolution (220 MHz) des holo- et apoprotéines ont révélé que les métaux influencent la structure tridimensionnelle de la protéine. Des études de PMR ont montré qu'au pH 3, l'apoprotéine existait presque entièrement sous forme de bobine aléatoire et qu'elle supposait une structure compacte et bien ordonnée lorsqu'elle retournait au pH neutre. L'holoprotéine a maintenu une structure compacte, apparemment dimérique, même au pH 3.
Précipitation mécanique de l’hémoglobine. Hb Köln (beta 98 Val mène à Met) a été trouvé de précipiter rapidement lors de tremblements mécaniques. Le taux de précipitation de Hb Köln est 5-6 fois plus rapide que celui de Hb S. La cinétique de précipitation de l'hémolyse du patient, qui est un mélange de Hb Köln et Hb A, a montré une courbe biphasée indiquant que Hb Köln précipite indépendamment de Hb A. L'instabilité de Hb Köln peut être attribuée au changement de conformation dans la proximité de l'hème. Le tremblement mécanique peut être utilisé comme une nouvelle méthode pour la détection et la quantification de l'hémoglobine Köln et d'autres hémoglobines instables.
Propriétés physiques et sous-unités de Haemopis grandis erythrocruorin. L'érythrocruorin du lécher Haemopis grandis possédait un S20,w de 57 S à pH neutre, son point isoélectrique à pH 6,0 et exposait une courbe d'oxygénation légèrement sigmoïde avec n environ 2,1 et P50 = 11,2 mm à pH 7,4. Un poids moléculaire minimum de 24000 +/- 1500 par groupe heme a été déterminé à partir de la teneur en fer et en heme, respectivement 0,22 +/- 0,01 et 2,73 +/- 0,14 % en poids. La composition de la sous-unité de l'érythrocruorin a été étudiée en utilisant la filtration au gel dans le dodécylsulfate de sodium et l'électrophorèse au gel de polyacrylamide dans le dodécylsulfate de sodium à pH neutre. Haemopis erythrocruorin dissocié en présence de dodécylsulfate de sodium en quatre sous-unités (1 à 4) possédant des poids moléculaires d'environ 27000, 23000, 21000 et 13500, respectivement. Lorsque l'érythrocruorine a été réduite par le mercaptoéthanol avant l'électrophorèse du dodécylsulfate de sodium, trois sous-unités ont été observées, possédant des poids moléculaires d'environ 13000 (I), 16500 (II) et 28000 (III). L'électrophorèse du dodécylsulfate de sodium des sous-unités isolées 1 à 4 a montré que la sous-unité I était fournie par les sous-unités 1 et 4, la sous-unité II était fournie par la sous-unité 1 et la sous-unité III était fournie par les sous-unités 2 et 3. Haemopis erythrocruorin semblait donc être composé d'au moins cinq chaînes polypeptidiques différentes. Il est probable que toutes les chaînes polypeptidiques constituantes n'aient pas été associées chacune à un groupe hème. La forme de l'érythrocruorin Haemopis observée par microscopie électronique semblait être cohérente avec l'array hexagonale à deux niveaux caractéristique des érythrocruorines annélides et des chlorocruorines.
Myosine du muscle lisse artériel : isolation après dépolymérisation de l'actine. Les protéines contractiles du muscle lisse artériel sont hautement solubles et peuvent être extraites à I = 0.05. Cependant, ils peuvent être précipités par une dialyse prolongée à pH 6 pour donner une actomyosine avec un ratio actin:myosine élevé, bien que variable. Le comportement de sédimentation de cette actomyosine à haute résistance ionique a été examiné en fonction du pH, de la concentration et de la composition des protéines par ultracentrifugation préparatoire. Des comparaisons avec des actomyosines musculaires squelettiques synthétiques de composition similaire ont démontré des différences significatives dans le comportement de ces deux systèmes. Il a été constaté que beaucoup actomyosine musculaire lisse n'est pas dissocié par des conditions de relaxation normale, et qu'il sédimente à un rythme plus lent que F-actine. La solubilité de la protéine supernatante (une actomyosine enrichi en myosine) dans 0,2 M K Cl (pH 7) dépendait du pH pendant la centrifugation. Une solubilité plus faible n'a été associée qu'à une concentration d'actine plus élevée dans le supernatant, ce qui suggère une dépendance à la repolymerisation de l'actine. La myosine pure a été sélectivement précipitée du supernatant par le polyéthylène glycol-6000, mais seulement lorsque la protéine était soluble à faible résistance ionique. La solubilité de la myosine purifiée était similaire à celle de la myosine provenant de muscles striés. Une relation entre la présence d'actine dépolymérisée et la solubilité élevée des protéines contractiles des muscles lisses est suggérée.
Hybrides des dérivés chimiques de la phosphatase alcaline Escherichia coli. Les activités des dimères hybrides de la phosphatase alcaline contenant deux sous-unités chimiquement modifiées ont été étudiées. Une espèce hybride a été préparée par dissociation et reconstitution d'un mélange de deux variantes produites par modification chimique de l'enzyme native avec l'anhydride succinique et le tétranitrométhane, respectivement. L'hybride succinyl-nitrotyrosyl a été séparé des autres membres de l'hybride par la chromatographie DEAE-Sephadex et ensuite converti en un hybride succinyl-aminotyrosyl par la réduction des résidus de tyrosine modifiés avec dithionite de sodium. Une comparaison des activités de ces deux hybrides avec les activités des dérivés succinyl, nitrotyrosyl et aminotyrosyl a montré que soit les sous-unités de phosphatase alcaline fonctionnent indépendamment, soit si les sous-unités tournent alternativement dans un mécanisme réciproque, alors l'activité intrinsèque de chaque sous-unité doit être fortement dépendante de sa sous-unité partenaire.
Certaines propriétés physico-chimiques de l'hémoglobine-manitoba (alpha2 102Ser remplacé par Arg (G9) bêta2). Hb-Manitoba a été découvert en 1970 [1] dans une famille canadienne d'origine britannique. Récemment, nous avons observé la même variante dans une deuxième famille, et avons constaté que le dérivé de l'oxygène de Hb-Manitoba est légèrement instable à 65 degrés C, dissocié moins facilement au pH alcalin que Hb-A, et forme des hybrides asymétriques avec d'autres hémoglobines qui sont facilement détectables par électrophorèse.
L'affinité à l'oxygène de l'hémoglobine Tak, une variante avec une chaîne bêta allongée. L'affinité à l'oxygène a été étudiée chez Hb Tak purifié, une variante de l'hémoglobine humaine avec des chaînes bêta allongées. Une valeur très faible de P50 a été trouvée qui n'a pas été influencée par l'ajout de 2,3 diphosphoglycérate. La valeur n était 1, indiquant la non-coopérativité. La courbe d'équilibre de l'oxygène de l'hémolysate sanguin tout entier contenant Hbs A et Tak était proche de celle de Hb A en haut de la courbe, tandis que le fond de la courbe s'est fortement écarté de celle-ci, indiquant une interaction faible si elle existe entre Hb A et Tak pendant l'oxygénation.
Effets de la ribonucléase de membrane et de la 3'-nucléotidase sur la digestion de l'acide polyuridylique par la membrane plasmatique du foie de rat. Les fragments de la membrane plasmatique du foie de rat isolé possèdent une activité ribonucléase qui, à un pH de 7,8 en présence de 10 mM EDTA, peut digérer l'acide polyuridylique (poly(U)) et l'acide polycytidylique (poly(C)) mais pas l'acide polyadénylique (poly(A)) et l'acide polyguanylique (poly(G)). Les fragments de la membrane plasmatique du foie de rat isolé possèdent une activité de ribonucléase qui, à un pH de 7,8 en présence de 10 mM EDTA, peut digérer l'acide polyuridylique (poly(U)) et l'acide polycytidylique (poly(C)) mais pas l'acide polyadénylique (poly(A)) et l'acide polyguanylique (poly(G)). Dans ces conditions, la préparation de membrane ne dégrade pas l'ADN natif ou dénaturé. Les produits de la réaction avec poly(U) (10 mM d'EDTA présent) peuvent être séparés sur DEAE-Sephadex en oligonucleotides de longueur de chaîne croissante. La plupart des produits sont des di- à hexa-nucléotides qui contiennent des groupes 3'-phosphate terminaux. Lorsque l'EDTA n'est pas présent (pH 7,8 ou 8,8) la préparation de la membrane plasmatique se dégrade à la fois en poly(A) et en poly(U). Avec poly(A) le produit est tout nucléoside tandis que avec poly(U) comme substrat la plupart du produit est nucléoside, mais aussi certains oligonucleotides sont produits. La ribonucléase libère très lentement des produits acides solubles à partir de concentrations élevées de poly(U) (mg/ml). L'uridine trinucleotide avec et sans un groupe phosphate terminal 3' est dégradé par la membrane plasmatique du foie de rat. Le diphosphate de trinucléotide est rapidement hydrolysé en nucléoside tandis que le trinucléotide lui-même est lentement digéré et produit des produits intermédiaires, y compris le nucléoside.
Modifications de l'activité phospholipidique (Na+ + K+)-ATPase due à la fluidité lipidique. Les effets du cholestérol et du Mg2+. L'ATPase (Na++K+)-activée, Mg2+-dépendante de la médulla externe du rein du lapin a été préparée sous une forme partiellement inactivée, soluble épuisée de phospholipides endogènes, en utilisant le déoxycholate. Cette préparation a été réactivée de 10 à 50 fois par des liposomes de phosphatidylserine sonorisés, mais pas par des liposomes de phosphatidylserine non sonorisés ou des liposomes de phosphatidylcholine sonorisés. L'enzyme reconstituée ressemblait à des préparations de membrane native de (Na+ + K+)-ATPase dans son pH optimal étant d'environ 7,0, montrant une activité optimale à des rapports mol de Mg2+:ATP d'environ 1 et une valeur de Km pour l'ATP de 0,4 mM. de cette activité réactivée à un pH constant de 7,0 et à un Mg2+ : le ratio mol de l'ATP de 1:1 a montré une discontinuité (changement aigu de pente) à 17 degrés C, avec des valeurs d'énergie d'activation (Ea) de 13-15 kcal/mol au-dessus de cette température et 30-35 kcal en dessous. Une autre discontinuité a également été trouvée à 8,0 degrés C et l'EA en dessous était très élevé (plus de 100 kcal / mol). L'augmentation des concentrations de Mg2+ à des rapports de Mg2+:ATP supérieurs à 1:1 a inhibé l'activité (Na+ + K+)-ATPase et a également aboli les interruptions dans les parcelles d'Arrhenius. L'ajout de cholestérol à la phosphatidylsérine à un rapport moléculaire de 1:1 inhibe partiellement (Na+ + K+)-la réactivation de l'ATPase. Les parcelles d'Arrhenius dans ces conditions ont montré une seule discontinuité à 20 degrés C et à des valeurs Ea de 22 et 68 kcal/mol respectivement au-dessus et en dessous de cette température. La Mg2+-ATPase insensible à l'ouabain a normalement montré un plan Arrhenius linéaire avec une Ea de 8 kcal/mol. Les liposomes mélangés cholestérol-phosphatidylserine ont stimulé l'activité de la Mg2+-ATPase, qui a maintenant également montré une discontinuité à 20 degrés C avec, cependant, une valeur augmentée de 14 kcal / mol au-dessus de cette température et 6 kcal / mol en dessous. Des études cinétiques ont montré que le cholestérol n'avait pas d'effet significatif sur les valeurs de Km pour l'ATP. Puisque le cholestérol et Mg2+ sont connus pour altérer les effets de la température sur la fluidité des phospholipides, les résultats ci-dessus sont discutés dans ce contexte.
Réactions conformationnelles et moléculaires à la variation du pH de l'adénosine triphosphatase de membrane purifiée de Micrococcus lysodeikticus. Une préparation d'ATPase à partir des membranes de Micrococcus lysodeikticus, solubilisée et plus de 95% pure, a montré deux bandes principales dans l'électrophorèse du gel de polyacrylamide analytique. Ils ne correspondaient pas aux isoenzymes car une bande pouvait être convertie en une autre en exposition à une valeur de pH légèrement alcaline. La conversion a été parallélisée par des changements de poids moléculaire, du dichroisme circulaire et des propriétés catalytiques. La dénaturation par pH à 25 degrés C a été suivie par le dichroïsme circulaire, l'ultracentrifugation et l'électrophorèse du gel de polyacrylamide. Une grande transition de conformation a eu lieu dans la gamme acide avec des points moyens à environ pH = 3,6 (I = 10(-4) M), 4,3 (I = 0,03 M) et 5,3 (I = 0,1 M). La transition était irréversible. Une forte agrégation de la protéine s'est produite dans cette gamme de pH. Le produit final était en grande partie une bobine aléatoire, mais même à pH 1,5 la dissociation en sous-unités individuelles n'était pas complète. Cependant, la dissociation partielle a eu lieu au pH 5 (I = 0,028 M). À cette valeur de pH, l'enzyme était inactive, mais 20-30% de l'activité pouvait être récupérée lorsque le pH était ramené à 7.5. Dans la région alcaline, le point central de la transition s'est produit près du pH = 11 (I = 0,028 M). Le pK de la plupart des résidus de tyrosine de la protéine était d'environ 10,9. Le déploiement était irréversible et la protéine fut bientôt convertie en espèces peptidiques avec des poids moléculaires inférieurs à ceux déterminés pour les sous-unités par électrophorèse au gel en présence de dodécyl sulfate de sodium. La protéolyse conventionnelle n'a pas pris en compte la transformation.
Les enzymes liées à la membrane.3. Activité de la protéase dans les leucocytes par rapport aux membranes érythrocytes. L’activité de la protéase a été détectée dans les membranes des érythrocytes bovins humains préparés par les procédures conventionnelles qui comprennent le lavage et l’élimination de la « couche buffy ». L'enzyme a été extraite par 0,75 M KCNS ou (NH4)2SO4 et a été activée par 0,4 à 0,5 M des mêmes sels. La poudre-azure, les fractions de membrane et les protéines solubles telles que l'hémoglobine, la caséine ou l'albumine étaient susceptibles d'être hydrolysées par la protéase membraneuse. La purification partielle de l'enzyme a été réalisée par électrophorèse de disque-gel sur polyacrylamide en présence de 0,25% de détergents positivement chargés tels que le bromure de cétyltriméthylammonium. Une protéase alcaline (pH 7,4) ayant des propriétés similaires à celles de l'enzyme érythrocyte a été trouvée dans les leucocytes. La similitude entre les propriétés des protéases leucocytaires et érythrocytaires et la corrélation de l'activité dans les membranes érythrocytaires avec la teneur en globules blancs de ces préparations suggèrent que l'activité enzymatique dans les leucocytes contaminants est responsable de l'activité des protéases membraneuses dans les érythrocyts.
[Formation structurelle dans les couches d'adsorption interphasique du lysozyme aux limites liquides]. Dans le cadre de la modélisation des biomembranes, les régularités de la formation et du développement des couches d'adsorption interphasiques du lysozyme à des limites liquides dans des conditions différentes et en fonction de la nature de la phase des glucides ont été étudiées par la détermination des caractéristiques mécaniques de ces couches. Les recherches effectuées ont montré que les couches les plus solides apparaissaient dans les conditions qui assuraient la formation du nombre maximum de liaisons intermoléculaires (ce qui dans un cas commun est effectué avec des désordonnances maximales des macromolécules qui arrivent à l'interphase).
Dépendance de la concentration de polymère de l'hélice à la transition de bobine aléatoire d'un polypeptide chargé dans une solution saline aqueuse. La transition de l'hélice à la bobine de poly (acide L-glutamique) a été étudiée dans les solutions de chlorure de potassium aqueux de 0,05 et 0,005 M en utilisant la titration potentiométrique et la mesure du dichroïsme circulaire. La dépendance de la concentration de polymère de la transition a été observée dans la plage de 0,006 à 0,04 monomol/e dans une solution de 0,005 M KG1. La dépendance de la concentration des polymères peut être interprétée par les théories actuelles de la transition des polypeptides chargés et des courbes de titration des polyelétrolytes linéaires faibles en tenant compte de l'effet de la concentration des polymères.
[Relation entre fluorescence et dichroisme circulaire du complexe de la sonde fluorescente 4-diméthylaminochalcone avec l'albumine sérique]. La sonde fluorescente (4-diméthylaminochalcone; DMH) a été liée non covalemment à l'albumine sérique humaine (HSA). La variation du pH a été due aux changements structurels de l'albumine sérique, qui a été déterminée en termes de DMH et de fluorescence HSA et de spectres CD. Des changements considérables de la fluorescence et du spectre CD ont été observés au pH 8 et 10, où il y a ionisation de deux résidus de tyrosine plus récemment titrés. On suppose que ces deux résidus de tyrosine sont dans la région de liaison et éteignent la fluorescence de DMH entre le pH 4 et 8. La frénésie disparaît si ces résidus sont ionisés (pH supérieur à 8) ou si la protéine subit la transition N-F (pH inférieur à 4).
[Étude de luminescence de l'effet de la température sur l'état de conformation du fibrinogène]. Les résultats sont présentés en mesurant les paramètres de fluorescence du fibrinogène dans la plage de température de 20 à 80 degrés C à différents pH de la solution. Il a été constaté que l'augmentation de la température de 20 à 40 degrés C pour les solutions avec un pH de 4,5-9,3 n'était pas accompagnée des changements de conformation des macromolécules fibrinogènes. Dans la plage de température de 40-50 degrés C pour les solutions neutres reconstruction de conformation de fibrinogène de caractère non dénaturé a eu lieu. Une augmentation de la température au-dessus de 50-55 degrés C entraîne des changements structurels significatifs de la molécule de fibrinogène qui sont de nature dénaturatrice.
[effets combinés de l'hypoxie et de l'hypercapnie sur l'état fonctionnel du centre respiratoire]. Des expériences ont été menées sur des chats sous anesthésie nembutale; une étude a été réalisée sur l'activité pulsante des neurones respiratoires bulbaires, l'activité électrique du diaphragme et des muscles intercostaux; pO2, pCO2, pH, saturation oxygénée du sang artériel ont été déterminés dans l'action combinée d'hypoxie et d'hypercapnie. Lorsque le mélange gazeux hypoxique a été administré pour la respiration, l'hypocapnie en développement a perturbé l'activité rythmique de décharge des neurones respiratoires, la respiration acquérant un caractère pathologique du type Cheyne-Stokes. Après l'ajout du mélange gazeux hypoxique de 2% de CO2, la composition gazeuse du sang artériel a approché les valeurs initiales; cette addition a empêché le développement d'hypercapnie et des perturbations de l'activité de décharge rythmique des neurones respiratoires. L'ajout de 5% de CO2 au mélange gazeux hypoxique a produit un effet négatif: d'abord, il a intensifié, puis supprimé l'activité des impulsions des neurones respiratoires, provoqué l'acidose métabolique et respiratoire, et a favorisé l'asphyxie.
[Niveau de coenzymes nicotinamide dans le foie et le myocarde des rats empoisonnés par le dichloréthane]. Des expériences ont été menées sur des rats mâles. Une étude a été réalisée sur la teneur en coenzymes de nicotinamide dans le foie et le myocarde 24 heures après l'administration de 0,5 ml de dichloroéthane dans l'estomac. Parallèlement à la perturbation de la structure morphologique du foie et du myocarde, l'augmentation de l'activité de l'alanine et des aminotransférases aspartiques dans le sérum sanguin, le dichloroéthane réduit la teneur en coenzymes nicotinamides et perturbe le ratio de leurs formes oxydées et réduites dans ces organes.
[Effet de la carbidine sur les réflexes de défense conditionnés]. Des expériences chroniques ont été menées sur des rats et des lapins ; une étude a été réalisée sur l'effet de la carbidine sur les réflexes de défense conditionnés dans la stimulation de la partie mesencéphalique de la formation réticulaire. La carbidine a empêché la dépression des réflexes de défense conditionnés causés par la stimulation de la partie mesencéphalique de la formation réticulaire. Cela a montré son influence dépressive sur les structures mentionnées, et a été confirmée par des expériences sur les lapins dans l'enregistrement des changements dans les biocurrents dans des conditions de stimulation de la formation reticulaire mesencéphalique.
[Niveau des coenzymes nicotinamides dans le myocarde des rats lors des effets des méthylxanthines (théophylline, théobromine, caféine) et des catécholamines]. Il a été démontré dans des expériences aiguës sur des rats qu'une heure après une injection intraperitoneale de théophylline (50 mg/kg) il y avait une diminution de la teneur en NAD + NADP de 19,4%, une tendance à une baisse de NAD.H2 + NADP.H2 a été exprimée, et le niveau total de coenzyme de nicotinamide a été réduit. Une tendance à diminuer le NAD + NADP et le niveau total de nucléotides de pyridine a été observée après l'administration de caféine. L’action des catécholamines et des méthylxanthines a été comparée. La théobromine n'a pas produit d'effet significatif sur les indices étudiés. Il a été démontré que l'isadrine réduisait le niveau de NAD + NADP; l'adrénaline (25 μg/kg) augmentait la teneur des formes oxydées (de 24%) et des formes réduites (de 48%) de nucléotides de pyridine. Une augmentation de la dose d'adrénaline à 1000 μg/kg a été accompagnée d'une réduction des formes oxydées (de 22,2 %) et du niveau total de coenzyme de nicotinamide (de 18 %).
Qualité de l'eau potable dans le comté de Georgetown. Les approvisionnements en eau potable de 161 communautés rurales, dans le comté de Georgetown, en Caroline du Sud, ont été sélectionnés au hasard pour la collecte d'échantillons. L'analyse a montré que la plupart des eaux étaient légèrement acides. Des concentrations faibles mais acceptables de chlorure, de cuivre, de fluorure, de sodium, de cadmium, de nitrate et de phosphate ont été trouvées. Quelques échantillons d’eau ont montré des niveaux plus élevés alors recommandés d’arsenic, de mercure, de zinc et de plomb. Bien que seulement 2% des échantillons aient dépassé la limite obligatoire de 0,05 ppm pour l'arsenic, 72% ont dépassé le niveau recommandé de 0,01 ppm. La limite obligatoire pour le manganèse a été dépassée dans 37% des eaux tandis que 88% ont dépassé la limite pour le fer. La teneur élevée en fer était généralement responsable de la turbidité élevée trouvée dans 45% des échantillons. La profondeur du puits et le revenu des consommateurs ont eu un impact sur la qualité de l'eau. Des preuves statistiques suggèrent que l'évacuation des réservoirs septiques était en partie responsable de la contamination des nitrates, des phosphates, du fer et de l'arsenic des approvisionnements en eau peu profonde. Les concentrations de plomb semblent varier en fonction du plombage utilisé et du pH des eaux.
L'importance d'un antrum et pylorus inervé et intact dans la prévention du reflux duodénogastrique post-opératoire et de la gastrite. Cette étude a examiné la relation entre le reflux duodénogastique, la gastrite et certains symptômes 6-12 mois après trois opérations pour l'ulcère duodénal non compliqué. Les opérations étudiées ont été la vagotomie gastrique proximal (PGV, 20 cas), la vagotomie troncale et la pyloroplastie (TV+P, 22 cas) et la vagotomie troncale et l'entrecotomie (TV+A, 21 cas). Le reflux duodénogastique a été évalué à la fois par une technique radiologique et par la mesure de la concentration de la bilirubine dans l'aspirate gastrique avant et après l'opération. L'incidence et la gravité de la gastrite post-opératoire ont été déterminées par biopsie endoscopique. Les symptômes ont été évalués en fonction du score symptomatique et de la classification de Visick. Il y a eu une corrélation significative entre le reflux duodénal et les preuves histologiques de la gastrite superficielle sévère et de l'atrophie glandulaire (P moins de 0-01). Il y avait également une association étroite entre le degré de reflux et la présence de brûlures d’estomac sévères, de douleurs épigastriques et de vomissements biliaires après l’opération. La quantité de reflux n'était pas différente avant l'opération. Il y avait significativement moins de reflux après PGV que après TV+P (P moins de 0-025) ou TV+A (P moins de 0-001). Les résultats indiquent qu’une opération qui préserve un antrum et un pylore inervés et intacts protégera contre le reflux duodénogastique post-opératoire, la gastrite et les symptômes.
Hémoglobine Rahere (beta Lys-Thr): Une nouvelle hémoglobine à haute affinité associée à une diminution de la liaison aux 2, 3-diphosphoglycérates et à une polycytémie relative. Une nouvelle hémoglobine avec une augmentation de l'affinité à l'oxygène, la bêta82 (EF6) lysine conduit à la thérionine (Hb Rahere), a été trouvée lors de l'enquête d'un patient qui a été trouvé d'avoir une concentration d'hémoglobine élevée après un compte sanguin de routine. La substitution affecte l'un des sites de liaison 2, 3-diphosphoglycérate, ce qui entraîne une affinité accrue pour l'oxygène, mais à la fois l'interaction haem-haem et l'effet alcaline de Bohr sont normaux dans l'hémolyse. Cette variante avait la même mobilité que l'hémoglobine A sur l'électrophorèse à pH alcalin, mais a été détectée en mesurant l'affinité de l'oxygène dans l'ensemble du sang; elle pouvait être séparée de l'hémoglobine A, cependant, par l'électrophorèse dans l'agar à pH acide. L'augmentation de la concentration d'hémoglobine était principalement due à une réduction du volume plasmatique (une polycytémie relative) et était associée à une augmentation persistante du nombre de blancs dans le sang. Ce cas souligne la nécessité de mesurer l'affinité à l'oxygène de l'hémoglobine chez tous les patients présentant une polycytémie absolue ou relative lorsque une cause évidente n'est pas évidente.
Papillotomie endoscopique et élimination des calculs biliaires. La papillotomie endoscopique a été essayée chez 59 patients atteints d'obstruction extrahépatique du système du conduit biliaire et a effectivement été réalisée chez 50 patients. Un couteau de diathérmie à haute fréquence spécial a été introduit via un duodénoscope dans le conduit biliaire commun terminal et le toit de la papille a été incisé. Chez 33 des 39 patients atteints de cholédocholithiase, les pierres sont entrées spontanément dans le duodénum ou ont été retirées par voie endoscopique. La sténose papillaire sans pierres ductales a été traitée avec succès par cette méthode chez huit patients sur 11. Une perforation de la jonction duodenocholedochal a eu lieu et a été réparée chirurgicalement. La papillotomie endoscopique et l'extraction de pierres est une méthode relativement sûre et efficace de traitement de la jaunisse extrahépatique.
Action postsynaptique inhibiteur de la taurine, du GABA et d'autres acides aminés sur les neurones moteurs de la moelle épinière de grenouille isolée. Les actions de la glycine, du GABA, de l’alpha-alanine, de la bêta-alanine et de la taurine ont été étudiées par des enregistrements intracellulaires des motoneurones lombaire de la moelle épinière isolée de la grenouille. Tous les acides aminés testés ont produit une réduction de l'amplitude des potentiels postsynaptiques, un blocage du potentiel d'action antidromique et une augmentation de la conductivité de la membrane. En outre, des polarisations de membrane ont eu lieu, qui étaient toujours dans la même direction que l'IPSP. Tous ces effets indiquent une action inhibiteur post-synaptique de ces acides aminés. Lorsque la force relative des différents acides aminés a été comparée, la taurine a eu la puissance inhibiteur la plus forte, suivie de la bêta-alanine, de l'alpha-alanine, du GABA et de la glycine. La strychnine et la picrotoxine appliquées topiquement ont induit des changements différents des potentiels post-synaptiques, indiquant que des systèmes inhibiteurs distincts pourraient être influencés par ces deux convulsivants. Les interactions avec les acides aminés ont montré que la picrotoxine diminuait sélectivement les actions post-sympathiques du GABA, tandis que la strychnine réduisait les effets de la taurine, de la glycine, de l'alpha et de la bêta-alanine. Mais des différences dans la susceptibilité de ces actions d'acides aminés à la strychnine pouvaient être détectées: l'action de la taurine était plus sensiblement bloquée par la strychnine par rapport à la glycine, l'alpha et la bêta-alanine. En ce qui concerne ces résultats, l’importance de la taurine et du GABA en tant que transmetteurs d’inhibition post-synaptique sur les neurones moteurs de la moelle épinière de la grenouille est discutée.
L'implication des lysophosphoglycérides dans la libération des neurotransmetteurs; la composition et la circulation des phospholipides des vésicules synaptiques du cortex cérébral de la guinea-poignée et de l'organe électrique de torpille et l'effet de la stimulation. (1) Les fractions synaptosomiques brutes (P2) dérivées du cortex cérébral de la guinea-poignée ont été incubées en présence de 50 mM de KCl dans un milieu de glucose de Krebs. Les organes électriques de torpilles marmorées ont été stimulés électriquement in vivo à 5 pulsations/sec pendant 30 minutes par des électrodes placées sur le lobe électrique. Les vésicules synaptiques ont été isolés de chaque source et les compositions des phospholipides ont été analysées et comparées aux vésicules provenant de contrôles non stimulés. (2) La lysophosphatidylcholine était le seul lysophosphoglycéride démontrable dans les vésicules synaptiques à partir de l'une ou l'autre source et ses faibles niveaux n'ont pas augmenté en raison de la stimulation chimique ou électrorchidienne. Dans chaque cas, il y avait une similitude étroite de la distribution des phospholipides dans les vésicules prises à partir d'échantillons de contrôle et stimulés. (3) Les expériences de contrôle ont montré des diminutions importantes de la teneur en acétylcholine des vésicules provenant de l'organe électrique stimulé et des diminutions plus petites de la teneur en acétylcholine des vésicules synaptiques provenant de fractions synaptosomiques brutes stimulées. Ces fractions ont été trouvées pour respirer linéairement en présence de 10 mM de glucose et les fractions de vésicule ont été montrés pour avoir de faibles niveaux de membranes contaminantes comme jugé par les analyses des enzymes marqueurs. (4) Les fractions synaptosomiques brutes provenant du cortex cérébral de la guiné-poignée ont été incubées dans un milieu de glucose de Krebs avec des acides gras étiquetés et du glucose [3H] en présence ou en absence de 50 mM de KCl. Des fractionnements sous-synaptosomiques ont été effectués et des radioactivités spécifiques de la phosphatidylcholine, de la phosphatidyléthanolamine, de la phosphatidylsérine et du phosphatidylinositol ont été déterminées dans les fractions D (vesicules synaptiques), E (microsomes) et H (synaptosomes perturbés). La libération du neurotransmetteur n'a pas significativement amélioré l'étiquetage des phospholipides dans l'une des fractions étudiées par rapport aux phospholipides provenant de fractions non stimulées. Ceci a été trouvé après deux temps d'incubation et en utilisant [14C]oleate, [14C]arachidonate, [3H]palmitate et [3H]glucose.
La réponse de sortie cardiaque à l'état acido-basique altéré lors de l'anesthésie de l'éther diéthylique. Les effets des changements d'acide-base sur la production cardiaque lors de l'anesthésie de l'éther diéthylique ont été étudiés chez 25 chiens mongrels préparés en implantant chirurgicalement une sonde électromagnétique du noyau non ferreux encastrée en plastique sur l'aorte ascendante. Les résultats sont: (1) L'acidémie métabolique n'a produit qu'une légère diminution de la production cardiaque, mais une diminution plus marquée est devenue évidente avec une diminution du pH(2) L'acidémie respiratoire a entraîné une légère augmentation de la production cardiaque. (3) Alcalémie respiratoire diminution de la production cardiaque. (4) L'alcaliémie métabolique a également entraîné une diminution de la production cardiaque.
La prévention de l'autolyse de la cornée stockée en utilisant un stéroïde comme stabilisateur de membrane lysosomique. De nombreux yeux donnés pour une greffe de la cornée sont rejetés en raison de signes d’autolyse dans le matériel du donneur. Le but de cette étude expérimentale était de déterminer si l'hydrocortisone agissant comme stabilisateur de membrane lysosomique pouvait prévenir ou retarder l'autolyse des cornées sous stockage, et si oui, quelle était la concentration la plus efficace. Différents groupes de cornée de lapin ont été placés dans la saline comme contrôles ou dans des concentrations variables d'hydrocortisone (10(-10) M à 10(-4) M à pH 7,4) à 37 degrés C et 4 degrés C. La phosphatase acide libérée après six heures a été mesurée biochimiquement. Cette enzyme a été utilisée comme une enzyme de marqueur qui reflète la labilisation lysosomique. Les résultats ont montré une stabilisation significative de la membrane lysosomique à 4 degrés C par rapport à 37 degrés C. Une tendance vers la stabilisation de la membrane lysosomique a été observée lorsque la concentration 10(-8) M d'hydrocortisone à 37 degrés C a été utilisée, il n'y a pas de stabilisation démontrable à 4 degrés C.
Les effets respiratoires des injections de H+ et de dinitrophénol dans l'espace subarachnoïde de la souche cérébrale des agneaux fœtaux. Le fluide cérébral mousseux (pH 5,37-8,38) ou 2,4-dinitrophénol (DNP) (0,15-1,5 mg) a été injecté dans l'espace subarachnoïde du tronc cérébral ventral des moutons fœtaux extérieurs. Les changements de pH sur la surface ventral de la médulla n'ont pas stimulé les efforts respiratoires ou induit des changements cardiovasculaires significatifs. La réponse respiratoire aux injections de DNP variait de l'absence de réponse à une ventilation rythmique prolongée qui était indépendante des chimiorécepteurs périphériques ou du contrôle du pH artériel et des tensions des gaz sanguins. Cette incohérence suggère un site effecteur quelque peu éloigné de la surface immédiate de la médulla. La fréquence cardiaque et la pression artérielle n'ont pas été affectées. Il est conclu que l'augmentation de la concentration de H+ dans le fluide extracellulaire de la médulla ventral du fœtus ne déclenche pas la respiration et que toute réponse respiratoire aux inhibiteurs métaboliques appliqués à cette zone n'est donc pas attribuable à un changement secondaire du pH de surface.
Fungistase du sol : augmentation des exigences en carbone et en azote exogènes pour la germination des spores par les volatiles fongistatiques dans les sols. Axénique, conidia lavée de Fusarium solani f. sp. phaseoli, Aspergillus flavus, et Verticillium albo-atrum ont été placés sur les disques d'agar purifiés Difco lavés ainsi qu'une solution saline inorganique contenant divers niveaux de substrates de carbone et d'azote. Ces disques ont été exposés aux volatiles provenant de six sols (pH 5,1 à 8,6). La germination macroconidiale du Fusarium solani a été inhibée principalement par des volatiles provenant de sols de pH 5.1, 6.1, 7.0 et 7.5, mais des niveaux élevés de glucose et de NH4Cl ont inversé cette inhibition, augmentant la germination à celle des contrôles sans sol, sans carbone ou azote. La germination conidiale d'A. flavus a été inhibée principalement par des volatiles provenant de sols à pH élevé (7.0, 7,8 et 8,6), et des niveaux élevés de glucose et d'un mélange d'acides aminés ont neutralisé cette inhibition. Les volatiles provenant de sols de pH 5.1, 6.1 et 7.5 ont stimulé la germination conidienne d'A. flavus. Les essais effectués après l'élimination du CO2 de l'air au-dessus du sol à un pH de 5,1 ont démontré que les volatiles inhibiteurs de A. flavus étaient produits par ce sol. Les essais ont indiqué qu'un composé soluble en KOH était un sol fongistatique volatile à la germination macroconidiale de F. solani. La nullification par les substrates de carbone et d'azote de l'inhibition de F. solani et A. flavus causée par les volatiles du sol est parallèle à celle de la fongistase du sol. La germination conidiale de V. albo-atrum a été nettement stimulée par les volatiles dans tous les sols testés et n'a pas été affectée par l'élimination du CO2. Les volatiles inhibiteurs du sol peuvent augmenter les besoins nutritionnels pour la germination des spores de certains champignons.
Enzymes réduisant la nitrofurazone dans l'E. coli et leur rôle dans l'activation des médicaments in vivo. Des études antérieures ont montré qu’Escherichia coli contient au moins deux enzymes qui réduisent la nitrofurazone et d’autres dérivés du nitrofurane. L'une de ces enzymes manque dans certaines souches mutantes résistantes à la nitrofurazone. Nous rapportons maintenant qu'il y a trois réductases nitrofuraniques séparables dans cet organisme: la réductases I (mol. poids environ 50 000, insensible à l'O2), la réductases IIa (mol. poids environ 120 000, inhibée par l'oxygène), la réductases IIb (mol. poids environ 700 000, inhibée par l'O2). Les métabolites instables formés lors de la réduction de la nitrofurazone par des préparations contenant des réductases IIa et IIb produisent des ruptures de l'ADN in vitro. Des expériences in vivo avec des souches résistantes à la nitrofurazone, qui ne contiennent pas de réductase II, mais qui contiennent des réductases IIa et IIb, ont montré que la mortalité, la mutation et la rupture de l'ADN sont toutes considérablement augmentées lorsque les cultures sont incubées dans des conditions anaérobies, c'est-à-dire dans des conditions telles que la réductase II est active. Ces résultats fournissent des preuves supplémentaires de l'importance de l'activation réductrice de la nitrofurazone.
Hydrolyse enzymatique de l'agar : purification et caractérisation de l'hydrolase de néoagarobiose et de l'hydrolase de p-nitrophényl alpha-galactoside. Le mélange de polysaccharides dans le composant gélant de l'agarose est hydrolysé en D-galactose et en 3,6-anhydro-L-galactose par une série d'enzymes hydrolytiques obtenues à partir de Pseudomonas atlantica. La dernière étape de dégradation dans la voie de la décomposition de l'agarose est l'hydrolyse de l'alpha-lien dans la néoagarobiose disaccharide produisant D-galactose et 3,6-anhydro-L-galactose. Pseudomonas atlantica lorsqu'il est cultivé sur l'agar produit deux enzymes spécifiques, p-nitrophényl alpha-galactose hydrolase et néoagarobiose hydrolase. La purification et la caractérisation partielle des deux enzymes sont présentées.
Température et pH optima pour 21 espèces de champignons thermophiles et thermotolérants. Un milieu minéral contenant du glucose complété par un extrait de levure de 0,01% est décrit sur lequel poussent toutes les espèces de champignons thermophiles et thermotolérants testés. Treize des 21 espèces ne nécessitent pas le supplément d’extrait de levure pour la croissance. En utilisant ce milieu minéral solide et complété, le pH et la température optimales pour la croissance de toutes les souches ont été mesurés. Aucune corrélation n'a été trouvée entre la température optimale et le pH optimal parmi les membres du groupe testé.
Différences physiologiques entre les isolats de Phytophthora cinnamomi. Des différences significatives dans l'activité de l'amylase, de la bêta-glucosidase et de la phosphatase ont été observées entre quatre isolats de Phytophthora cinnamomi cultivés dans des sols stérilisés modifiés par des nutriments pendant 20 jours. Le pH optimal de l'amilase pour les quatre isolats se trouvait dans une gamme relativement étroite; à un pH de 5,5, chaque isolat se trouvait dans les 90 % de son activité maximale. Les isolates SB-216-1, 1-281, et C-39 ont chacun présenté une activité bêta-glucosidase maximale à pH 5.0 et une activité phosphatase maximale à pH 5.0-5.5. L'activité maximale de ces deux enzymes de l'isolat A-7725 s'est produite à un pH de 3.5. Dans les expériences chronométriques, les isolats 1-281 et A-7725 ont montré une activité d'amylase plus importante que les deux autres isolats. Pour la bêta-glucosidase, l'activité la plus élevée a été observée pour SB-216-1 ; l'activité de 1-281 a été intermédiaire et l'activité la moins élevée a été observée pour les isolats A-7725 et C-39. Les isolates SB-216-1 et 1-281 ont montré la plus grande activité de la phosphatase; l'isolat C-39 était intermédiaire en activité, et A-7725 était le moins actif. Les résultats indiquent que des différences significatives existent entre les isolats testés et que ces différences peuvent être mesurées quantitativement par les méthodes décrites.
Régulation et propriétés d'une invertase de Clostridium pasteurianum. Une invertase intracellulaire a été induite dans les cultures de Clostridium pasteurianum utilisant le saccharose comme source de carbone pour la croissance. Cette synthèse enzymatique pourrait être supprimée par l'ajout de fructose d'une culture de croissance de saccharose. En revanche, l'activité de l'invertase n'a pas été affectée par l'ajout de glucose aux cellules de croissance du saccharose et cette enzyme pourrait être induite dans une culture de métabolisme du glucose par l'ajout du saccharose. Cette enzyme a été purifiée 10,5 fois par rapport à la dérive induite, EC 3.2.1.26) par des études de spécificité du substrat. L'invertase avait un pH optimal de 6,5 et un Km apparent de 79,5 mM pour le saccharose, et nécessitait une forte concentration de phosphate de potassium pour une activité maximale. L'invertase a été complètement inactivée par un traitement thermique de 2 minutes à 60 degrés C. Cette enzyme a été fortement inhibée par le p-hydroxymercuribenzoate (pCMB) et faiblement inhibée par 5,5'-dithiobis (acide 2-nitrobenzoïque), tandis que la cystéine pouvait considérablement inverser l'inhibition de pCMB, suggérant que le ou les groupes sulfhydryl étaient nécessaires pour l'activité de l'invertase.
Des études de caractérisation sur l'adénosine triphosphatase liée à la membrane (ATPase) d'Azotobacter vinelandii. L'activité de l'adénosinétriphosphatase (ATPase) (EC 3.6.1.3) dans Azotobacter vinelandii se concentre dans la fraction membraneuse R3 qui est directement associée à la fonction de transport d'électrons d'Azotobacter. Les cellules d'azotobacter perturbées par sonicité ont été examinées pour la distribution de l'activité de l'ATPase et l'activité spécifique la plus élevée (et les unités d'activité) a été constamment trouvée dans la fraction de membrane de la particule R3 qui sédimente sur l'ultracentrifugation à 144 000 X g pendant 2 h. Lorsque l'intervalle de temps de sonication a été augmenté, l'activité de l'ATPase liée à la membrane ne pouvait ni être solubilisée ni libérée dans la fraction supernatante. L'activité optimale de l'ATPase s'est produite à un pH de 8,0; l'ion Mg2+ lorsqu'il a été ajouté à l'analyse a été stimulant. L'activité maximale a toujours eu lieu lorsque la stéchiométrie de Mg2+:ATP était de 1:1 sur un ratio molaire au niveau de concentration de 5 mM. Les ions de sodium et de potassium n'ont pas eu d'effet stimulant. La cinétique de la réaction était linéaire pour les intervalles de temps étudiés (0-60 min). L'ATPase liée à la membrane dans la fraction R3 a été stimulée 12 fois par le traitement wiTH TRypsin, et les études de fractionnement ont montré que le traitement par la trypsine n'a pas solubilisé l'activité de l'ATPase hors de la fraction de transport d'électrons de la membrane R3. L'ATPase n'était pas froid labile et la température pendant la préparation de la fraction R3 n'a pas eu d'effet sur l'activité; le refroidissement de nuit à 4 degrés C, cependant, a entraîné une perte d'activité de 25% par rapport à une perte de 14% lorsque la fraction R3 a été stockée pendant la nuit à 25 degrés C. Une inactivation marquée (bien que variable, généralement environ 60%) a eu lieu par congélation de nuit (-20 degrés C), et la sonication ultérieure n'a pas réussi à restaurer l'activité ATPase. Cela indique que la reaggregation de la membrane (par congélation) n'était pas responsable de l'inactivation de l'ATPase. L'ajout d'azide, d'ouabaine, de 2,4-dinitrophénol ou d'oligomycine au système d'analyse n'a entraîné ni inhibition ni stimulation de l'activité de l'ATPase. La propriété de l'activation de la trypsine et que l'activité de l'ATPase est la plus élevée dans la fraction de transport d'électrons R3 suggère que son rôle fonctionnel probable est dans le couplage du transport d'électrons à la phosphorylation oxydative.
Effets des émissions de mélange de zinc sur la microflore des sols forestiers. Dans les 2 km d'une fonte de zinc (Zn) à Palmerton, en Pennsylvanie, près du Lehigh Water Gap, jusqu'à 13,5% de Zn par poids a été mesuré dans l'horizon O2 du sol, et jusqu'à 8% de Zn dans l'horizon A1. Le nombre total de bactéries, d'actinomycètes et de champignons (mesuré par le nombre de plaques de dilution) a été considérablement réduit dans les sols les plus gravement contaminés par le Zn par rapport aux sols de contrôle. La réduction des populations microbiennes peut être une cause partielle de la diminution du taux de décomposition des déchets à Lehigh Gap. La croissance de la plupart des bactéries provenant des sites de contrôle a été réduite de 100 à 200 muM Zn, la plupart des actinomycètes de 100 muM Zn, et la plupart des champignons de 100 à 1000 muM Zn dans l'agar d'extrait de Pablum mince (TPab). Tous les actinomycètes testés et les bactéries non spores isolées des sols pollués par le Zn de Lehigh Gap étaient tolérants au Zn, poussant normalement dans des milieux contenant 600-2000 muM de Zn. La plupart des champignons, indépendamment de la source, étaient capables d'avoir au moins 50% de croissance normale à 700 muM Zn. Les bactéries tolérantes au zinc, les actinomycètes et les champignons ont été facilement isolés des sols à faible teneur en Zn, ce qui suggère que la sélection pour la tolérance au Zn pourrait se poursuivre rapidement. Les espèces acidophiles de Mortierella ont été éliminées sélectivement près de la fonte, apparemment en raison du pH élevé du sol. Peryronellaea glomerata (Corda) Goidanich et Coniothyrium spp. Elles n’ont été trouvées que dans les sols de haute qualité.
L'activation de l'alpha-Naphthoflavone de la synthétase de 6-hydroxyméthylbenzo(alpha)pyrène. L'alpha-Naphthoflavone active la synthase aryl hydroxyméthyl des enzymes microsomiques liées à la membrane et solubles du foie et des poumons des rats. L'enzyme catalyse l'hydroxyméthylation du benzo(alpha)pyrène au dérivé 6-hydroxyméthyl.
Effets de l'administration continue de N, N-diméthyl-4-phénylazoaniline (DAB) sur l'activité et l'inductibilité de certaines enzymes métabolisant le médicament dans le foie de rat. (1) L'effet d'une alimentation relativement faible en protéines contenant 0,06 % de DAB pendant 29 semaines sur l'activité de la DAB-azorréductase, de la nitrorréductase (acide p-nitrobenzoïque), de la N-oxydase (N,N-dyméthylaniline), de la N-déméthylase (DAB), du cytochrome P-450, de la NADPH-cytochrome c-réductase, de la bêta-glucuronidase et de l'arylsulfatase A a été étudié. Des diminutions rapides ont eu lieu dans l'activité des six premières enzymes, atteignant des valeurs minimales entre 4 et 8 semaines. Les activités ont ensuite augmenté dans tous les cas pour contrôler ou atteindre des niveaux de contrôle. Ce taux d'augmentation a été le plus faible pour le cytochrome P-450. À 4 semaines, l'activité de l'azorréductase avec l'agent chimiothérapeutique CB10-252 (I) en tant que substrat était significativement plus élevée que chez les rats de contrôle. Des augmentations préliminaires ont eu lieu dans les activités de la bêta-glucuronidase et de l'arylsulfatase A et l'activité de ces derniers n'a jamais chuté en dessous du niveau contrôlé. (2) Une enquête a été menée sur les effets différentiels de l'alimentation en colorant sur certaines des activités enzymatiques dans les deux grands lobes du foie et des différences ont été trouvées. (3) L'effet du prétraitement du phénobarbital (PB) sur les rats nourris par DAB a été étudié à intervalles de 4 semaines. L'activité de la DAB-azorréductase et de la nitrorréductase a augmenté tout au long de la période, tandis que l'activité des enzymes lysosomiques a diminué. (4) Après l'alimentation de la DAB pendant 4 semaines, l'effet de la PB et du 3-méthylcolanthrène (MC) sur les activités de la DAB-azorréductase, de la CB10-252-azorréductase et des composants de l'azorréductase-cytochrome P-450, de la NADPH-cytochrome c-réductase, de la CO-CB10-252-azorréductase n'a pas été induit par la PB ou la MC, et la CO n'a pas inhibé sa réduction. Sa réduction ne dépendait que légèrement de NADH. Le CO a entraîné une diminution relative plus importante de l'activité de la DAB-azorréductase chez les animaux colorés et aussi chez les animaux suivant le prétraitement PB et MC, ce qui implique un rôle plus important du cytochrome P-450 chez les animaux colorés.
Quelques caractéristiques de deux systèmes d'azorréductase dans le foie de rat. Relevance pour l'activité de l'acide benzoïque 2-[4'-di(2"-bromopropyl)-aminophenylase] (CB10-252), un composé présentant une activité cytotoxique latente. Le système impliqué dans la réduction de l'acide aminophénylbenzoïque 2-[4'-di(2''-bromopropyl) (CB10-252), un agent conçu pour traiter le cancer primaire des cellules du foie, a été démontré être localisé principalement dans la fraction supernatante de 108 000 g de foie de rat homogénat. Il est également présent dans d'autres organes, en particulier dans la rate. La DAB-azorréductase, telle que montrée précédemment, est présente presque entièrement dans la fraction microsomique et se trouve en grande concentration uniquement dans le foie. Le pH maximum de la CB10-252-azorréductase impliquant l'importance du groupe 2'-carboxyl dans la détermination de la spécificité du substrat. L'utilisation d'inhibiteurs enzymatiques et d'autres additifs a montré que le CB10-252 N'était PAS de l'oxydase d'axanthine ou de la réductase de dihydrofolate. Son activité n'a pas été affectée par le monoxyde de carbone, la phénobarbitone (PB) ou le 3-méthylcholanthrène (MC) prétraitement. L'amélioration de l'activité par les ions ferreux et le FAD a indiqué qu'au moins une partie du système de réduction pourrait impliquer une flavoprotéine avec le FAD comme groupe prothétique. L'activité de la CB10-252-azorréductase et de la méthyl-azorréductase a été réduite par les menadions (vitamine K3), le cyanure et le propylgallate. Une préparation de diaphorase provenant du cœur de porc a réduit à la fois le CB10-252 et la méthylation avec les systèmes de génération de NADPH et de NADH.
Inhibition par le mercure du complexe de synthétase des acides gras aviaires. (1) Les injections sous-cutanées ou intra-abdominales de 8 mg de HgCl2/100 g de poids corporel ont considérablement réduit l'activité de synthase des acides gras hépatiques des poules 1 h après l'injection. La dépression a eu lieu malgré le fait que les poussins ont continué à manger jusqu'au moment où ils ont été tués. Dans ces mêmes conditions, l'activité hépatique de l'acétyl-CoA carboxylase (EC 6.4.1.2) n'a pas été affectée par HgCl2, tandis que l'activité du système mitochondrial d'allongement des acides gras a été stimulée. (2) Lorsque le 2-mercaptoéthanol a été inclus dans le milieu d'incubation pour une préparation hautement purifiée de la synthase des acides gras, 500 mM de HgCl2 ont été nécessaires pour montrer une inhibition définitive de l'enzyme. Lorsque le 2-mercaptoéthanol a été omis, 50 mM de HgCl2 était inhibiteur et 100 mM de HgCl2 a aboli l'activité enzymatique. (3) 2 mM de dithiothreitol a complètement protégé la préparation de la synthétase des acides gras purifiés contre l'inhibition par 100 mM de HgCl2. Lorsque le dithiotréitol a été ajouté après l'ajout de l'enzyme au milieu contenant du mercure, la protection de l'enzyme n'était pas complète. (4) Dialyse des fractions de cytosol provenant de poules injectées avec HgCl2 contre 500 vol. de 0,2 M de tampon de phosphate de potassium (pH 7.0) contenant 1 mM d'EDTA et 10 mM de dithiothreitol pendant 4 h à 4 degrés a stimulé l'activité de la synthèse des acides gras des fractions. La dialyse des fractions de cytosol provenant de poules non injectées dans les mêmes conditions n'a pas eu d'effet sur l'activité de la synthétase des acides gras. (5) Ces données soutiennent l’hypothèse selon laquelle l’effet inhibiteur de l’HgCl2 administré in vivo sur l’activité de la synthétase des acides gras hépatiques chez les poules est médié par l’interaction du mercure avec les groupes sulfhydryliques de l’enzyme.
[Base phospholipase de Naja nigricollis venom]. Il est confirmé que le venin de N. nigricollis contient plusieurs phospholipases dont l’une est une phospholipase A. Cette enzyme est toxique pour les souris lorsqu’elle est injectée par voie intraveineuse. In vitro, il réagit à la lécithine du jaune d’œuf produisant de la lysolécithine et empêche le phénomène de la coagulation du sang. Une identité immunologique a été établie entre cette phospholipase de base et deux phospholipases acides présentes dans le même venin.
[Mortalité spontanée et lésions vasculaires dans 3 souches de rats avec des niveaux de pression artérielle différents]. Nous avons observé une mortalité élevée et significative chez les rats hypertendus spontanés par rapport aux contrôles normotensives et hypotensives, dans la cinquième génération. Les rats hypertendus présentaient une fréquence élevée d'hémorragie cérébrale et de periarterite nodose.
Effets de la baisse de la pression artérielle sur le flux sanguin cérébral dans le babouin. Influence du système nerveux sympathique. L'influence du système nerveux sympathique sur la réponse circulatoire cérébrale aux réductions graduées de la pression artérielle moyenne a été étudiée chez les babons anesthésiés. Le flux sanguin cérébral a été mesuré par la méthode de clairance 133Xe, et la pression artérielle a été réduite par une hémorragie contrôlée. Chez les babons normaux, la constante du flux sanguin cérébral a été maintenue jusqu'à ce que la pression artérielle moyenne soit d'environ 65% de la valeur de base; par la suite, le flux sanguin cérébral a diminué lorsque la pression artérielle a été réduite. Une sympathectomie cervicale supérieure d'une durée de 2 à 3 semaines n'a pas affecté la réponse normale. En revanche, à la fois la sympathectomie chirurgicale aiguë (division du tronc cervical) et le blocus des récepteurs alpha (1,5 mg/kg de phénoxybenzamine) ont amélioré le maintien du flux sanguin cérébral face à l'hypotension hémorragique dans laquelle le flux sanguin cérébral n'a pas diminué jusqu'à ce que la pression artérielle moyenne soit d'environ 35% de la valeur de base. Les résultats indiquent que le système nerveux sympathique n’est pas impliqué dans le maintien du flux sanguin cérébral face à une baisse de la pression artérielle. En effet, l’implication est que la décharge sympathique surrénale accompagnant l’hypotension hémorragique est préjudiciable à, plutôt que responsable, l’autorégulation cérébrale.

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TransCorpus-bio-fr

TransCorpus-bio-fr is a large-scale, parallel biomedical corpus consisting of French synthetic translations of PubMed abstracts. This dataset was created using the TransCorpus framework and is designed to enable high-quality French biomedical language modeling and downstream NLP research.

Dataset Details

Source: PubMed abstracts (English)
Target: French (synthetic, machine-translated)
Translation Model: M2M-100 (1.2B) using TransCorpus Toolkit
Size: 22 million abstracts, 36.4GB of text
Domain: Biomedical, clinical, life sciences
Format: one abstract per line
Pre-Trained Model: TransBERT-bio-fr 🤗

Motivation

French is a low-resource language for biomedical NLP, with limited availability of large, high-quality corpora. TransCorpus-bio-fr bridges this gap by leveraging state-of-the-art neural machine translation to generate a massive, high-quality synthetic corpus, enabling robust pretraining and evaluation of French biomedical language models.

from datasets import load_dataset

dataset = load_dataset("jknafou/TransCorpus-bio-fr", split="train")

print(dataset)
# Output:
# Dataset({
#    features: ['text'],
#    num_rows: 21567136
# })

print(dataset[0])
# Output: {'text': " [Études biochimiques sur les composants de la camomille/III. Des études in vitro sur l'activité antipeptique de (--)-alpha-bisabolol (transl de l'auteur)].\t(--)-l'alpha-bisabolol a une action antipeptique primaire en fonction de la posologie, qui n'est pas causée par une altération de la valeur du pH. L'activité protéolytique de la pepsine est réduite de 50 % par l'ajout de bisabolol dans un rapport de 1/0,5. L'action antipeptique du bisabolol n'a lieu qu'en cas de contact direct. En cas de contact préalable avec le substrat, l'effet inhibiteur est perdu."}

Benchmark Results

TransBERT-bio-fr pretrained on TransCorpus-bio-fr achieve state-of-the-art results on the French biomedical benchmark DrBenchmark, outperforming both general-domain and previous domain-specific models on classification, NER, POS, and STS tasks. See TransBERT-bio-fr for details.

Why Synthetic Translation?

Scalable: Enables creation of large-scale corpora for any language with a strong MT system.
Effective: Supports state-of-the-art performance in downstream tasks.
Accessible: Makes domain-specific NLP feasible for any languages.

Citation

If you use this corpus, please cite:

@misc{knafou-transbert,
    author = {Knafou, Julien and Mottin, Luc and Ana\"{i}s, Mottaz and Alexandre, Flament and  Ruch, Patrick},
    title = {TransBERT: A Framework for Synthetic Translation in Domain-Specific Language Modeling},
    year = {2025},
    note = {Submitted to EMNLP2025. Anonymous ACL submission available:},
    url = {https://transbert.s3.text-analytics.ch/TransBERT.pdf},
}

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